【摘 要】
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目的为构建具有凝集性、免疫反应性的双功能融合蛋白。方法本研究利用特异性引物从重组质粒pMD-2E8scFv和pMD-G中以PCR方法扩增2E8基因(抗人红细胞H抗原单链抗体基因)和Kg基
【机 构】
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广西兽医研究所广西畜禽疫苗重点实验室,北京博莱得利生物技术有限责任公司
【基金项目】
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广西科技厅基本科研业务费专项(桂科专项11-4)~~
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目的为构建具有凝集性、免疫反应性的双功能融合蛋白。方法本研究利用特异性引物从重组质粒pMD-2E8scFv和pMD-G中以PCR方法扩增2E8基因(抗人红细胞H抗原单链抗体基因)和Kg基因(狂犬病毒G基因主要抗原表位区),采用重叠延伸(SOE)PCR法拼接成融合基因2E8Kg,构建原核表达质粒pET-Trx-2E8Kg并将其转化至BL21(DE3)pLysS中进行诱导表达并对诱导菌液进行SDS-PAGE分析。结果 2E8Kg融合基因获得了高效表达并主要以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的23.5%左右,分子量约为77.7kD,与预期的大小一致。将表达的蛋白以亲和层析法进行纯化并通过谷胱甘肽还原法进行复性,纯化后蛋白纯度达到98.9%。结论经Western-blot检测和红细胞凝集试验证明,2E8kg融合蛋白既能够与狂犬病毒(RV)高免血清发生特异性反应,又能够与人红细胞结合,具有双功能特性。
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