【摘 要】
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目的: 应用酵母双杂交方法筛选BRCA2相互作用蛋白编码基因,验证其相互作用并研究其功能联系. 方法: 以BRCA2基因 3′端片段构建酵母双杂交质粒,筛选正常人乳腺上皮细胞cDNA文
【机 构】
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第四军医大学,塔夫茨大学医学院放射肿瘤研究所
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目的: 应用酵母双杂交方法筛选BRCA2相互作用蛋白编码基因,验证其相互作用并研究其功能联系. 方法: 以BRCA2基因 3′端片段构建酵母双杂交质粒,筛选正常人乳腺上皮细胞cDNA文库,获得编码相互作用蛋白的基因,采用免疫共沉淀、哺乳细胞双杂交和荧光酶测定等方法进一步验证蛋白间相互作用和功能联系. 结果: 采用酵母双杂交系统筛选,获得了多个编码BRCA2相互作用蛋白的基因,其中包括已知的FHL2蛋白;免疫共沉淀和哺乳动物细胞双杂交试验显示BRCA2和FHL2在体内特异性结合,并证实FHL2在体内形成同源二聚体;转录活性分析发现BRCA2与FHL2有协同转录激活作用. 结论: 发现BRCA2与FHL2蛋白间相互作用和功能联系,为BRCA2功能研究提供了新的方向.
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