【摘 要】
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海南岛为中国油茶资源分布的最南缘,海南油茶资源丰富,特色显著.本研究以海南油茶基因组DNA为模板,采用单因素试验和正交试验相结合的方法,分析DNA浓度、dNTPs浓度、TqDNA聚
【机 构】
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海南大学园艺学院,海口,570228;海南省农业科学院热带园艺研究所,海南省热带特种经济植物种质资源创新利用重点实验室,海口,571100;l海南大学园艺学院,海口,570228
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海南岛为中国油茶资源分布的最南缘,海南油茶资源丰富,特色显著.本研究以海南油茶基因组DNA为模板,采用单因素试验和正交试验相结合的方法,分析DNA浓度、dNTPs浓度、TqDNA聚合酶用量和引物浓度对海南油茶SRAP-PCR扩增结果的影响,构建海南油茶SRAP-PCR体系,对多态性引物组合进行筛选,为SRAP分子标记在海南油茶资源遗传多样性评价和鉴定提供条件.单因素试验结果表明:在本试验中,海南油茶基因组DNA浓度高低对扩增效率影响不大,低浓度dNTPs有利于获得较好的扩增产物,而中高浓度的Taq酶和引物可提高扩增效果.正交试验结果表明:在适宜浓度范围内,各因素对海南油茶SRAP-PCR扩增影响大小依次为:引物＞dNTPs＞Taq DNA聚合酶＞模板DNA;总体系为20 μL时,最佳反应体系中模板DNA用量为5 ng,dNTPs浓度为0.20 mmol/L,引物浓度为0.60 μmol/L以及Taq DNA聚合酶用量为4.00 U.采用稳定SRAP-PCR体系,对400对SRAP引物进行筛选,获得32对多态性好、条带清晰的有效引物,可用于海南油茶遗传多样性分析和种质资源鉴定等研究.
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