【摘 要】
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目的:构建人MHC Ⅱ类反式激活因子(CIITA)基因启动子Ⅳ4种不同单倍型DNA的真核表达载体.方法:根据人CIITA基因启动子Ⅳ区的2个单个核苷酸多态性(SNPs)位点C-1350T和G-944C,可
【机 构】
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第三军医大学西南医院全军感染病研究所
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目的:构建人MHC Ⅱ类反式激活因子(CIITA)基因启动子Ⅳ4种不同单倍型DNA的真核表达载体.方法:根据人CIITA基因启动子Ⅳ区的2个单个核苷酸多态性(SNPs)位点C-1350T和G-944C,可以构建出4种单倍型(CG、CC、TG和TC).分别以CG/CG、CC/CC、TG/TG和TC/TC4种基因型的人基因组DNA为模板,用PCR法扩增出包含启动子Ⅳ两个SNP位点的长487bp的DNA片断,TA克隆至pMD18-T Simple载体后用MluⅠ/HindⅢ双酶切,纯化回收后分别与同样双酶切的荧光素酶报告基因载体PGL3一Basic和PGL3-Promomr相连接,构建CG-PGL3一Basic、CG-PGL3-Promoter、CC-PGL3-Basic、CC-PGL3-Promoter、TG-PGL3-Basic、TG-PGL3-Promoter、TC-PGL3-Basic、TC-PGL3-Promoter8个表达载体,并测序验证其DNA序列.结果:实验得到含有人CIITA基因启动子Ⅳ4种不同单倍型DNA序列的真核表达载体8个,且测序证实了这8个表达载体序列与理论序列完全一致.结论:成功构建人CIITA基因启动子Ⅳ不同单倍型的真核表达载体,为CIITA基因启动子Ⅳ不同单倍型的功能研究奠定基础.
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