【摘 要】
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细胞周期检查点激酶1 (Chk1)作为DNA复制检查点和DNA损伤反应的重要成员,在有丝分裂和减数分裂中都具有重要作用.为探究Chk1对猪卵母细胞减数分裂的影响,本研究首先采用免疫
【机 构】
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延边大学农学院,吉林延吉133000;吉林省延边黄牛种质资源保护工程研究中心,吉林延吉133000
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细胞周期检查点激酶1 (Chk1)作为DNA复制检查点和DNA损伤反应的重要成员,在有丝分裂和减数分裂中都具有重要作用.为探究Chk1对猪卵母细胞减数分裂的影响,本研究首先采用免疫荧光染色和实时荧光定量PCR技术检测了Chk1在猪卵母细胞不同时期的表达和定位,随后利用chir-124抑制Chk1的表达,研究其对猪卵母细胞减数分裂的影响,以及相关基因的表达和纺锤体的变化.结果 表明,Chk1在4个时期(GV、GVBD、MⅠ、MⅡ)均有表达,GV期主要定位在生发泡内,GVBD期主要定位在核周围,MⅠ期和MⅡ期主要定位在纺锤体上;用不同浓度的chir-124处理卵母细胞来抑制Chk1,发现0.5μmol/L的chir-124对卵母细胞生发泡破裂(GVBD)的影响最大,可显著提高猪卵母细胞处于GV-Ⅳ期的比例(P＜0.05),并且可显著提高卵母细胞达到GVBD期的比率(P＜0.05),但对后续的成熟没有显著影响;随后对MⅡ期卵母细胞的基因表达进行检测发现,Chk1的抑制可调节cdk1、cdc25C、cyclin61基因的表达,并使gwl基因的表达显著下降(P＜0.05),从而调节卵母细胞恢复减数分裂的进程;Chk1的表达会激活纺锤体组装检查点(SAC),阻止同源染色体分离,将猪卵母细胞定位在MⅠ期,而减少Chk1的表达后,猪卵母细胞可渡过MⅠ期,进入MⅡ期.综上,在GV期使用chir-124抑制Chk1的表达可促进猪卵母细胞恢复减数分裂,并促进后续的成熟.
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