论文部分内容阅读
HLA-DR属于主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex，MHC)Ⅱ类分子，是由α链和β链组成的异二聚体，表达于抗原呈递细胞(antigen presenting cells，APCs)表面。其功能是将多肽抗原呈递给CD4+T细胞，从而引起一系列的免疫反应，如T细胞激活，自身免疫反应等。对HLA-DR的结构，HLA-DR与抗原、TCR的相互作用研究对了解T细胞激活原理和免疫调节机制有重要的作用。 噬菌体展示是广泛用于蛋白质相互作用研究的方法，有很多独到的优点，但是用噬菌体展示HLA-DR还没有报道。本研究利用丝状噬菌体M13展示HLA-DR，制备了M13-DR1，DR15和DR51噬菌体。以这些噬菌体作为“APC”(phage APC，pAPC)，验证了其特异性结合多肽抗原以及激活特异性CD4+T细胞的能力。实验结果表明重组的单链HLA-DR分子在TG1宿主菌中有表达，并且被展示在所制备的M13-DR噬菌体表面。噬菌体展示的HLA-DR1(M13-DR1)可以与多肽抗原HA307-319结合，但不结合随机多肽R15或MBP85-99;M13-DR15可与MBP85-99结合，但不结合HA307-319或R15;M13-DR51与三种多肽都有一定的结合。这些噬菌体展示的HLA-DR与多肽抗原以不同亲和力特异地结合结果与以前的报道相符，说明了噬菌体展示的HLA-DR保持了体内APC表达的HLA-DR的抗原结合活性。在T细胞激活实验中，结合了HA307-319的M13-DR51噬菌体可以激活HA307-319特异的T细胞，该T细胞对噬菌体本身或是结合了HA307-319的M13-DR1噬菌体都没有反应。根据HLA-DR分型结果，此细胞带有HLA-DRB1*15和HLA-DRB5*01基因，相应表达的HLA-DR为H-LA-DR15和HLA-DR51;使用多肽刺激PBMC，制备特异的T细胞时TCR与HA307-319/HLA-DR51作用，而不识别HA307-319/HLA-DR1。本实验中HA307-319特异的T细胞不能识别HA307-319/M13-DR1复合体，而是特异地识别HA307-319/M13-DR51复合体并被其激活。这个结果表明M13-DR噬菌体可以作为pAPC向T细胞呈递抗原，激活T细胞，而且TCR在特异的抗原识别中是识别多肽/MHC复合体，而不仅取决于多肽抗原。用MBP85-99特异的T细胞做的实验也证明了这一点。 综上所述，本研究成功地将重组的单链HLA-DR分子展示在了M13噬菌体表面，并且保持了其原有的抗原结合特性。结合了多肽的M13-DR噬菌体可以作为pAPC特异地与TCR结合并激活特异的T细胞。这个新的体外抗原呈递系统可以用于HLA-DR与抗原、TCR相互作用，T细胞激活机制的研究以及与HLA-DR有特定亲和力或其它免疫活性的多肽抗原的筛选。