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杆状病毒,包括核多角体病毒( Nucleopolyhedravirus,NPV)和颗粒体病毒(Granulovirus,GV),是多种农业、蔬菜、森林和牧场害虫的病原体,已经有多种杆状病毒被开发为商业化的生物杀虫剂。本论文研究了杆状病毒包涵体蛋白之间的共同抗原性,为利用免疫层析技术快速检测不同种类杆状病毒的浓度打下了基础。另外,作者还构建了含舞毒蛾(Lymantria dispar)核多角体病毒(LdNPV)的增效蛋白基因的重组苜蓿银纹夜蛾(Autographa californica)核多角体病毒( AcNPV),以期增强杆状病毒的杀虫活性。
本论文分三章。
第一章:文献综述。由三个部分组成:第一部分概括介绍了杆状病毒生物学、分子生物学研究进展和应用研究情况;第二部分介绍了杆状病毒增效蛋白的发现、特性以及应用;最后介绍了本论文的目的和意义。
第二章:对多种杆状病毒包涵体蛋白之间的血清学关系进行了研究。在比对已公布的37种杆状病毒包涵体蛋白氨基酸序列的基础上,选定棉铃虫(Helicoverpaarmigera)核多角体病毒(HaNPV)多角体蛋白的两个高度保守多肽(54-113 aa和206-245 aa)制备了多克隆抗体,并用Western blot法检测这两个高度保守多肽与多种杆状病毒包涵体蛋白之间的血清学关系。结果表明,HaNPV多角体蛋白两个多肽的抗体与14种NPV的多角体蛋白及5种GV的颗粒体蛋白均有明显的杂交信号,表明杆状病毒的包涵体蛋白之间具有共同的抗原决定簇。根据杆状病毒包涵体蛋白之间的这种血清学关系,讨论了利用免疫金试纸技术检测病毒杀虫剂中包涵体含量的可行性。
第三章:已经在多种杆状病毒中鉴定了编码增效蛋白( Enhancin)的基因。增效蛋白是一种金属蛋白酶,能够增强杆状病毒和苏云金芽孢杆菌对鳞翅目昆虫的感染性。作者将LdNPV的Enhancin1基因克隆于原核表达载体上,在大肠杆菌BL21菌株中进行了表达,免疫家兔制备了多克隆抗体。同时,利用AcNPV的Bac-to-Bac系统,将LdNPV Enhancin1基因插入苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒(Autographacalifornica nucleopolyhedrovirus,AcNPV)基因组中,并让Enhancin的N端分别与松毛虫质型多角体病毒的VP3 N端的79 aa片段和AcNPV ODV-E66 N端的23 aa片段融合,将增效蛋白包装到包涵体或者ODV的囊膜上,构建重组AcNPV,以期增强病毒的杀虫活性。