iRoot FM对牙髓卟啉单胞菌的抗菌效果评价及对根尖牙乳头干细胞生物学性能的影响

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目的:年轻恒牙牙髓病、根尖周病治疗成功的关键在于有效的根管消毒,建立有利于牙根继续发育的根管内微环境。根管消毒既要有效控制感染,又要满足对牙源性干细胞无毒性作用,恢复年轻恒牙牙根发育的潜能。传统的根管消毒材料如氢氧化钙[calcium hydroxide,Ca(OH)2],三联抗生素糊剂(triple antibiotic paste,TAP)虽能够满足有效的根管消毒,但会对牙源性干细胞产生毒性作用。iRoot FM作为新型注射型生物陶瓷材料,生物相容性好,化学性能稳定,适用于年轻恒牙牙髓病及根尖周病的治疗。本实验旨在研究iRoot FM对牙髓卟啉单胞菌(Porphyromonas endodontalis,P.endodontalis)ATCC35406的抗菌效果及其对根尖牙乳头干细胞(stem cells from apical papilla,SCAP)增殖、分化等生物学性能的影响。材料和方法:1.细菌实验:建立琼脂平板扩散实验模型,根据iRoot FM,Ca(OH)2及TAP产生抑菌环的大小分析不同材料的抗菌性能;肉汤稀释实验检测iRoot FM,Ca(OH)2及TAP的最小杀菌浓度。2.细胞实验:制备不同浓度梯度的iRoot FM,Ca(OH)2及TAP条件培养基,测量各条件培养基的pH值,分别进行SCAP培养,CCK-8检测1、3、5 d细胞增殖能力;Real-time PCR和Western blot分别检测成骨及成牙本质相关基因、蛋白(ALP、DMP-1)的表达水平,评估经3种材料预处理后对SCAP成骨/成牙本质向分化能力的影响;茜素红S染色检测三种材料预处理SCAP后的矿化能力。采用SPSS 17.0软件包统计学分析,四组间的比较采用单因素方差分析,每两组间的比较采用LSD-t检验,P<0.05为差异具有统计学意义。结果:iRoot FM组的抑菌环直径为(20.74±4.35)mm,而Ca(OH)2组及TAP组的抑菌环直径分别为(24.89±3.84)mm和(34.51±1.20)mm。TAP抗菌能力最强,iRoot FM具有强抗菌能力,与Ca(OH)2的抗菌能力比较无统计学差异(P>0.05)。iRoot FM,Ca(OH)2及TAP的最小杀菌浓度分别为12.5 mg/mL,2.5mg/mL,0.01 mg/mL。i Root FM条件培养基随着浓度的增高pH值变化不明显,而Ca(OH)2及TAP分别随着浓度的增高pH值增高或降低,差异具有显著性。低浓度iRoot FM促进SCAP的增殖,高浓度iRoot FM对细胞增殖无明显影响,而高浓度的Ca(OH)2及TAP会对SCAP产生毒性作用。i Root FM能够提高SCAP的ALP、DMP-1表达水平(P<0.05),Ca(OH)2对SCAP的ALP、DMP-1表达水平无明显影响,而TAP降低两者的表达(P<0.05)。iRoot FM诱导SCAP矿化的能力强于Ca(OH)2及TAP(P<0.05)。结论:新型生物陶瓷材料iRoot FM对牙髓卟啉单胞菌具有强抗菌作用,对SCAP无细胞毒性,且低浓度时促进SCAP增殖及成骨/成牙本质向分化。iRoot FM可以作为年轻恒牙牙髓病、根尖周病治疗中优选的根管消毒材料。
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