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研究背景脊髓损伤(Spinal Cord Injury,SCI)是一种常见的严重创伤,常导致相应的脊髓、神经功能障碍,具有相当高的致残率,给患者、家属和社会带来极大的痛苦和沉重的负担。研究认为导致损伤脊髓的结构和功能难以恢复的主要原因是:脊髓损伤后局部微环境的变化不利于轴突的再生,而由此继发的神经传导束连续性的中断导致了临床上各种症状的发生。嗅鞘细胞(OECs)兼具中枢和周围两个神经系统细胞特性,可表达和分泌多种细胞粘附分子及神经营养因子,对中枢神经元轴突再生有着其它类型细胞难以比拟的的支持作用。本研究探讨了人胚胎嗅鞘细胞(hOECs)的原代培养方法及其形态学特征,为下一步移植治疗实验研究和临床研究提供了实验材料。
目的:探讨应用体外延迟差速贴壁法结合阿糖胞苷(Ara-C)抑制剂法对hOECs进行分离纯化的可行性,为SCI移植治疗实验研究提供材料。
方法:取自然流产3-6个月人胚胎,在解剖显微镜下分离嗅球的嗅神经层和颗粒层,采用原代培养的方法培养hOECs;随后应用延迟差速贴壁法结合Am-C抑制剂法对hOECs进行纯化;并用形态学方法观察其体外生长特性;最后用P75和GFAP免疫细胞化学染色法鉴定hOECs的纯度。
结果:利用此方法成功培养出hOECs。在培养hOECs同时,在显微镜下对培养纯化的hOECs体外生长特性进行观察,原代培养5天的hOECs胞体呈长梭形,多极状,立体感强,折光性好;8天后。胞体变大,突起变长,并逐渐相互交织成网。14天后细胞主要表现为双极或多极形态。同时对细胞进行P75免疫细胞化学染色,并计算细胞纯度。结果发现经过纯化培养2-8天后,P75阳性达到90%以上。第8天后细胞纯度随培养时间延长而显著下降,培养至25天时P75染色阳性细胞率降至43%,而在未进行纯化培养的对照组,随着培养时间的延长,hOECs迅速被其它细胞污染,而且P75染色阳性细胞所占比例较低。8天后,hOECs的比例降至18%。
结论:本培养纯化hOECs的方法是一种较为有效、稳定而且可靠的方法,为hOECs移植治疗SCI的研究提供足量的细胞资源。