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集约化养殖中,仔猪腹泻属常见病症,肠产毒性大肠杆菌(enterotoxigenic E.coli,ETEC)是主要病原菌之一,造成的经济损失严重。卵黄抗体(Egg yolk immunoglobulin,IgY)作为一种抗生素替代品用来控制仔猪腹泻已有一定的研究基础,但抗体滴度和产率低限制了IgY的应用,免疫佐剂是主要影响因素之一。而常用的弗氏佐剂有一定的毒副作用,免疫原性弱,安全性较差,故寻找高效安全的佐剂来获得大量的高效价IgY用于防治ETEC引起的仔猪腹泻任务迫切。CpG-ODN(Oligodeoxynucleotide DNA,ODN)是一种高效安全的疫苗佐剂,可以有效提高机体的免疫应答水平。黄芪多糖、壳聚糖作为中药类免疫佐剂,存在资源广泛、成本低廉的优点,应用前景良好。本实验根据目前研究中表明的CpG-ODN的免疫活性与其序列结构特点的关系,以CpG-ODN 2135为模板设计了4条不同序列的CpG-ODN。通过体外实验和体内实验分别探讨了不同序列的CpG-ODN佐剂、壳聚糖、弗氏佐剂及黄芪多糖佐剂对蛋鸡细胞和体液免疫应答方面的影响。应用CCK-8法体外检测不同佐剂对鸡脾脏淋巴细胞的刺激作用,结果表明CpG-ODN S2序列的免疫刺激活性最好,刺激指数可达3.64。通过体内实验考察不同佐剂配合ETEC灭活疫苗免疫蛋鸡后对蛋鸡产蛋性能、细胞免疫及体液免疫的影响。选取来航蛋鸡(120日龄)120只,随机分为10组,三点注射免疫法分别进行3次免疫。第1~2组分别应用PBS和ETEC K88灭活全菌疫苗;第3~7组应用ETEC K88分别配合不同序列的CpG-ODN S1~S5(30μg/羽);第8~10组应用ETEC K88分别配合弗氏佐剂、壳聚糖佐剂(200 mg/m L)和黄芪多糖佐剂(25 mg/m L)。产蛋率结果显示,整个实验期间弗氏佐剂组平均产蛋率(71.81%)显著低于其他组,严重影响蛋鸡的产蛋性能。应用ELISA法检测的血清中IL-2及IFN-γ含量、血清抗体效价、IgY效价结果表明,黄芪多糖组初免后可快速激活细胞因子IL-2(229.64 ng/L)、IFN-γ(28.58 ng/L);CpG-ODN S2组在整个实验期间IL-2、IFN-γ的分泌量均较高,强度和持久度最好,对蛋鸡细胞免疫水平的影响明显优于弗氏佐剂(P<0.05)。CpG-ODN S2组血清抗体、IgY效价最高分别可达95.00万、80.00万,且强度和持久度最好,对蛋鸡体液免疫水平的影响明显优于弗氏佐剂(P<0.05);S1组和S4组IgY效价分别为75.00万、65.00万,与弗氏佐剂相比差异不显著(P>0.05)。综上所述,本研究自行设计的CpG-ODN S2序列作为免疫佐剂促进蛋鸡细胞和体液免疫应答显著优于弗氏佐剂,免疫原性好,可用于制备ETEC灭活疫苗来产生大量的高效价卵黄抗体防治仔猪腹泻。