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目的：观察不同浓度一氧化氮(nitric oxide，NO)供体硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)与一氧化氮合酶(NOS)抑制剂左旋硝基精氨酸甲基酯(N-nitro-L-arginine methyl ester,L-NAME)对小鼠生发泡(germinal vesicle，GV)期卵母细胞体外成熟的影响；在适宜浓度的NO、或/和L-NAME、或／和二丁酰环腺苷酸(dibutiry1 cyclicAMP，dbcAMP)、或/和孕酮(progestone，P)共同作用下，观察卵母细胞体外成熟的情况并分析它们之间的相互关系；在NO、L-NAME、dbcAMP、P等不同处理因素作用下，利用RT-PCR技术检测卵母细胞成熟过程中c-erbB<,2>mRNA表达的变化。利用Western-blotting技术检测卵母细胞中成熟促进因子(maturation promoting factor，MPF)的调节亚基细胞周期蛋白B<,1>(cyclinB<,1>)的合成变化、丝裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated．proteinkinase,MAPK)的活性变化。为进一步了解的卵母细胞发育、成熟机理及其调控增添新资料，为开辟新的促生育和抗生育途径提供实验依据。
方法：给予3-4周龄健康雌性未成年昆明小白鼠腹腔注射PMSG 8IU。44-48小时后断头处死，取双侧卵巢，在体视显微镜下用已消毒的4号针头小心剔除卵巢周围脂肪和结缔组织，刺破卵泡，释放出卵丘卵母细胞复合体(cumulus cell-enclosedoocyte,CEO)。用口径大于复合卵直径的口吸管吸取形态完好的GV期CEO，反复漂洗3次，移入每孔装有950μl培养液，并加入不同处理因素的4孔培养板内，每孔40-50个左右卵母细胞。在37℃、5％CO<,2>、95％空气、100％湿度的培养箱内培养12h。观察不同处理因素下，不同时间GVBD发生率和PBl排出率从而判断卵母细胞的成熟情况。
结果：(1)小剂量一氧化氮供体SNP对卵母细胞的成熟无作用。10<-4>mol／L、10<-5>mol／L、10<-6>mol／L的SNP组与对照组比较，6h卵母细胞生发泡破裂(germinal vesiclebreakdown．GVBD)率与12h第一极体排出(First polar body,PB1)率均无显著性差别(P>0.05)(2)L-NAME抑制卵母细胞体外成熟，观察发现10<-2>mol／L、10<-3>mo1／L L-NAME与对照组比较，卵母细胞生发泡破裂(GVBD)率与第一极体(PBl)排出率均有所降低(P<0.05)。(3)d小剂量SNP(10<-5>mol／L)能够逆转dbcAMP对卵母细胞的抑制作用，L-NAME减弱SNP对dbcAMP的逆转作用。SNP+dbcAMP组与dbcAMP组相比较，卵母细胞GVBD率与PBl率均有所升高(P<0.05)。SNP+dbcAMP+L-NAME组与SNP+dbcAMP组比较，卵母细胞GVBD率与PBl率均有所降低(P<0.05)。(4)P能够逆转dbcAMP对卵母细胞的抑制作用，P与SNP共同作用于卵母细胞时，对dbcAMP抑制起协同逆转作用，L-NAME减弱SNP与P对dbcAMP的逆转作用。P+dbcAMP组与dbcAMP组相比较，卵母细胞GVBD率与PB 1率均有所升高(P<0.05 )。 P+dbcAMP+SNP组与P+dbcAMP组相比较， 卵母细胞GVBD率与PBl率均有所升高(P<0.05)。P+dbcAMP+SNP+L-NAME组与P+dbcAMP+SNP组比较，卵母细胞GVBD率与PBl率均有所降低，且有显著性差别(P<0.05)。(5)RT-PCR结果显示，卵母细胞成熟过程中存在有C-erbB<,2>mRNA的表达，dbcAMP可以下调C-erbB<,2>mRNA的表达从而抑制卵母细胞的成熟，P与SNP则能逆转dbc AMP对C-erbB2mRNA表达的下调作用，L-NAME减弱这种逆转作用。(5)Western-blotting结果显示：卵母细胞GVBD时，MAPK、MPF被激活，dbcAMP抑制MAPK的磷酸化和cyclinBl的合成从而抑制卵母细胞的成熟，P与SNP能明显逆转dbc AMP对MAPK的磷酸化、cyclinB<,1>合成的抑制作用，使卵母细胞中的磷酸化的MAPK，cyclinB<,l>含量明显增加，从而促进MAPK、MPF的活化与细胞的成熟。L-NAME减弱P与SNP这种逆转作用，L-NAME能明显抑制MAPK的磷酸化和cyclinBl的合成使卵母细胞中的磷酸化的MAPK，cyclinBl含量明显降低，从而抑SUMAPK、MPF的活化和细胞的成熟。
结论：小剂量NO本身对卵母细胞成熟无明显影响，但能逆转L-NAME与dbcAMP对卵母细胞成熟的抑制作用，这种逆转作用在P存在时进一步加强。小剂量NO逆转dbcAMP的机制可能与增强原癌基因c-erbB<,2>mRNA表达、促进MAPK磷酸化和加强cyclinB<,1>合成有关。