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目的:通过复制孕鼠慢性应激肝郁模型,并以舒肝健脾补肾中药进行干预,从中医肝郁角度探讨胎儿宫内发育迟缓的机理,研究舒肝健脾补肾中药对妇女妊娠及胎儿宫内发育的影响,从而揭示肝郁影响生殖功能的机理及舒肝健脾补肾中药的作用机理。
方法:以三月龄的Wistar受孕大鼠为研究对象,利用束缚筒、制动箱和程控穿梭箱复制大鼠肝郁模型,以滋肾育胎丸和舒肝健脾补肾方为实验用药。将60只性周期表现正常大鼠随机分为五组,即正常对照组(简称正常组)、模型对照组(简称模型组)、舒肝健脾补肾方高剂量组(简称舒肝健脾补肾高组)、舒肝健脾补肾方低剂量组(简称舒肝健脾补肾低组),滋肾育胎丸组(简称阳性药组),每组12只。大鼠按2:1比例合笼,每天进行阴道脱落细胞涂片,直到见到大量云片状上皮细胞中夹有大量精子作为妊娠第一天。造模同时,在同种饲养条件下,正常组和模型组灌以等量蒸馏水,舒肝健脾补肾高、低组分别灌以舒肝健脾补肾方浸膏稀释液高剂量(13.12g/kg·d)和低剂量(6.56g/kg·d)。滋肾育胎丸组灌以滋肾育胎丸稀释液高剂量(2.42g/kg·d),连续给药18天,每日1次。心理应激刺激18天后,在孕鼠的妊娠第19天断头处死动物,进行指标测定。通过敞箱试验观察孕鼠自主活动的行为学变化,用放射免疫法测定孕鼠血清P、PRL、IGF-1、IGF-2的含量,用免疫组化法检测子宫蜕膜PR水平,对胎鼠、胎盘进行称重。
结果:(1)模型组同正常组相比,孕鼠自主活动异常增多,敞箱试验中穿越格数显著增加(P<0.01),直立次数明显增加(P<0.01);血清P、PRL、IGF-1、IGF-2明显降低(P<0.01);子宫蜕膜PR水平显著降低(P<0.01);胎鼠、胎盘重量明显降低(P<0.01)。(2)经中药治疗后,异常增多的自主活动减少,敞箱试验中舒肝健脾补肾高、低组孕鼠穿越格数显著减少(P<0.01),舒肝健脾补肾高组孕鼠直立次数明显减少(P<0.01),舒肝健脾补肾低组孕鼠直立次数减少(P<0.01);舒肝健脾补肾高组孕鼠血清P显著高于模型组(P<0.01),舒肝健脾补肾低组和阳性药组孕鼠血清P高于模型组(P<0.05),舒肝健脾补肾高组优于阳性药组;舒肝健脾补肾高组及阳性药组孕鼠血清IGF-1、IGF-2高于模型组(P<0.05),舒肝健脾补肾高组优于阳性药组;舒肝健脾补肾高组子宫蜕膜PR水平与模型组相比有显著升高(P<0.01),阳性药组高于模型组(P<0.05);舒肝健脾补肾高组和阳性药组胎鼠、胎盘重量显著高于模型组(P<0.01),舒肝健脾补肾高组优于阳性药组;舒肝健脾补肾高组PRL显著高于模型组(P<0.01),阳性药组高于模型组(P<0.05),舒肝健脾补肾高组优于阳性药组。(3)经中药治疗后舒肝健脾补肾低组血清IGF-1、IGF-2与模型组相比无明显差异(P>0.05);舒肝健脾补肾低组子宫蜕膜PR水平与模型组相比无明显差异(P>0.05);舒肝健脾补肾低组胎鼠、胎盘重量与模型组相比无明显差异(P>0.05);舒肝健脾补肾低组血清PRL与模型组相比无明显差异(P>0.05)。
结论:用束缚筒、制动箱、程控穿梭箱复制的慢性应激肝郁动物模型是一个比较理想的中医证候的动物模型。慢性应激刺激可影响妊娠大鼠及胎鼠在宫内的发育,导致胎鼠宫内发育迟缓。本实验证明了舒肝健脾补肾方能提高慢性应激肝郁模型胎鼠、胎盘的重量。能提高胰岛素样因子水平、孕激素水平、子宫蜕膜孕激素受体水平及生理状态下泌乳素水平。能明显改善胎鼠在宫内发育的状况。为临床运用舒肝健脾补肾法治疗肝郁型胎儿宫内发育迟缓提供了理论依据。