山楂原花色素对HepS细胞凋亡的研究

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原花色素是植物体内广泛存在的多酚类化合物,属于生物类黄酮,它们是由不同数量的儿茶素或表儿茶素聚合而成的,最简单的原花色素是儿茶素或表儿茶素的二聚体,此外还有三聚体,四聚体等。依据聚合度的大小,通常将二至四聚体称为低聚物,而五聚体以上的称为高聚体。原花色素为水溶性物质,极易吸收,消除自由基的能力与分子结构、聚合度有关。原花色素无毒、无过敏等特性。研究表明,低聚原花色素具有很强的生物活性,能清除机体内过剩的自由基,提高人体的免疫力,可以防治心血管疾病及抗肿瘤等。 作为天然的抗氧化剂,目前原花色素主要来自于葡萄籽,而葡萄籽提取物在食品、药品、化妆品等有着广阔的应用前景。本文主要借鉴相关的研究成果,采用理论和实践相结合的研究方法,从山楂中提取原花色素,并且研究了山楂原花色素的结构、组成和含量。山楂原花色素在组成和含量与葡萄籽原花色素不同,其生物学效应也有明显的差异。 肝癌是人类常见的癌症之一,本文旨在探讨山楂原花色素体外和体内抑制肝癌HepS细胞及诱导其凋亡的作用。通过体外培养肝癌HepS细胞,以不同浓度山楂原花色素(0~40 μg/mL)处理12~72 h后,MTT法测定细胞生长抑制作用,研究结果显示山楂原花色素能抑制HepS细胞的生长,并且呈现出明显的时效和量效关系。采用DNA片断分析和DNA琼脂糖凝胶电泳,结果显示随着山楂原花色素浓度的增高,HepS细胞中的DNA片段率也在增加,并且DNA琼脂糖凝胶电泳图中,山楂原花色素组的DNA均出现典型的凋亡DNA梯形带(DNA ladder)。采用Hoechst 33258荧光染色以及流式细胞技术(Annexin V/PI双染法)检测细胞凋亡,在荧光显微镜下,凋亡细胞呈亮绿色,但是正常HepS细胞不易吸收Hoechst 33258,细胞呈暗绿色,染色比较浅。PI和Annexin V—FIFC双染后,经流式细胞仪检测、分析显示凋亡HepS细胞比例明显增多。模型小鼠体内实验,以不同浓度的山楂原花色素(100~150 μg/mL),采用腹腔注射,实验十五天后检测各项指标,发现山楂原花色素的作用对比生理盐水组比较明显,尤其在红细胞指数和脾脏指数方面。 因此,我们可以得出结论山楂原花色素能够抑制肝癌HepS细胞株的生长,可能与诱导其细胞凋亡有关。
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