目的：探讨1,25二羟基维生素D3[1,25-(OH)2-vitamin D3，1,25(OH)2D3]与冠状动脉钙化积分的关系及其临床诊断价值，评价酶联免疫吸附试验（Enzymelinked immunosorbent assay，ELISA）检测1,25(OH)2D3的方法学性能。　　方法：采用ELISA法检测正常人和冠状动脉不同钙化积分冠心病患者血清中1,25(OH)2D3水平，并进行统计分析，绘制其ROC曲线分析其诊断性能，应用美国临床和实验室标准协会（CLSI）相关规则对ELISA法检测1,25(OH)2D3进行准确度、线性范围、回收试验、精密度、灵敏度和干扰试验等指标进行方法学性能评价。　　结果：1,25-(OH)2D3在对照组与不同钙化积分疾病组之间、以及对照组与疾病组之间其血清水平浓度差异显著，疾病组血清中1,25-(OH)2D3含量明显低于对照组；钙化积分与1,25(OH)2D3呈负相关（p<0.05）；ROC曲线显示1,25-(OH)2D3其曲线下面积为0.616，诊断阈值为70.77pg/ml，诊断灵敏度为48.50％，特异性为95.80%，Youden指数为0.43；ELISA法检测1,25-(OH)2D3的准确度相对偏倚为0.88%～7.18%，线性范围分别是0.28～500ng/mL，回收率是94.80～102.50%，批内变异系数为4.66%～8.86%，批间变异系数为8.50%～9.60%，灵敏度为0.28ng/mL；低浓度的胆固醇、甘油三酯和胆红素对检测1,25-(OH)2D3几乎无干扰，高浓度的胆固醇、甘油三酯、和胆红素对检测1,25-(OH)2D3有较小干扰率；与电化学发光方法学比较差异不显著。　　结论：1,25(OH)2D3在对照组和疾病组中表达不同，与钙化积分呈负相关，对冠心病诊断价值明显，可以为动脉粥样硬化的预防和治疗提供一种新的策略；ELISA法检测1,25(OH)2D3性能较好，符合公认的质量指标，可在临床工作中推广使用。