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该研究应用酵母双杂交系统从人肝组织cDNA文库中筛选与人肝再生增强因子(hALR)的相互作用蛋白.主要方法如下:一、抽提胎儿肝组织的mRNA,逆转录聚合链式反应(RT-PCR)扩增到hALR基因读码框片断,将其定向重组入DNA-BD载体pGBKT7,并用限制性内切酶酶切和DNA测序分析来鉴定构建的"诱饵"质粒pGBKT7-hALR.二、醋酸锂(LiAc)转化法将"诱饵"质粒转入酵母菌AH109,通过SDS-PAGE和western blot方法检测重组菌AH109(pGBKT7-hALR)中是否有BD-hALR融合蛋白的表达.采用营养缺陷培养和β-半乳糖苷酶活性滤膜影印分析法检测该诱饵质粒能否自身激活报告基因表达.三、将MATa型的重组菌AH109(pGBKT7-hALR)与预转化酵母菌Y187(MATα型)的人肝组织cDNA文库接合.通过营养缺陷培养和X-α-Gal活性分析筛选与hALR相互作用的阳性侯选克隆.四、lyticase法抽提阳性侯选克隆的酵母总DNA;转化E.coli Top10,扩增获得单一文库质粒;运用PCR和限制性内切酶酶切法将这些文库质粒分组;各组取一代表做回转实验排除假阳性;对确定的阳性克隆进行DNA测序,测序结果提交GenBank分析.结论:一、成功构建的质粒pGBKT7-hALR在酵母AH109体内能够表达融合蛋白BD-hALR,对宿主细胞无毒性,且无自主激活报告基因表达的能力,可作为酵母双杂交系统中的"诱饵"质粒.二、应用酵母双杂交系统成功地从人肝组织cDNA文库中筛选到hALR的作用蛋白,为阐明hALR的信号传导等分子生物学机制奠定基础.