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目的 各类损伤引起机体的修复涵盖了一系列的生物学活动,通过细胞信号的传递引起细胞核内靶蛋白的表达,是一切生物学效应的基础。本研究拟通过对创面愈合过程中细胞信号活化状态的观察,认识参与组织修复信号间的调控关系,以及外用bFGF对信号通路的影响作用。为创面愈合的网络调控机制提供理论基础,同时为提高创面愈合的质量以及临床上生长因子的合理应用提供理论依据。 方法 利用大鼠深Ⅱ°烫伤模型,通过对烫伤大鼠愈合过程中各类修复细胞增殖、迁移、转化和凋亡活动中所涉及信号通路的表达情况观察,以及外用bFGF对信号蛋白的表达、抑制作用,初步确定该过程中主要其作用的信号系统MAPKs。在离体条件下,建立成纤维细胞烫伤诱导的凋亡模型,通过对MAPKs通路的激活或抑制作用,观察其下游靶蛋白的变化。收集人胎儿、成年和老年不同时期的皮肤标本以及不同愈合结局(增生性瘢痕、慢性溃疡和平坦瘢痕)组织标本。调查人体发育各阶段、不同修复结局皮肤内主要细胞酪氨酸激酶受体的表达差异。采用的方法有:免疫组化(免疫荧光)、原位杂交、DNA凝胶电泳、透射电镜、常规组织病理HE和V.G特染、逆转录聚合酶链式反应(PT-PCR)、共聚焦显微镜、Western blotting等。检测修复过程中增殖、凋亡及相关基因蛋白(如caspase、p53、Bcl-2、Bax、c-myc)的表达,以及MAPKs磷酸化蛋白的变化情况。对比不同发育阶段、不同愈合结局表皮生长因子受体和成纤维细胞生长因子受体的表达差异。 结果 我们划分三个部分进行总结: 1 外源性bFGF对深Ⅱ°烫伤大鼠创面修复细胞增殖、凋亡、转化、再上皮化和迁移的影响 外源性bFGF诱导创面内成纤维细胞c-myc的表达,导致p53蛋白激活。随即引起PCNA、caspase3蛋白的改变,MAPKs参与该过程。外用bFGF后引起成纤维细胞TGF-β1的表达增加,对成纤维细胞向肌成纤维细胞转化发挥作用,同时因加速愈合又对其凋亡的发生。外源性bFGF对血管内皮细胞的增殖作用不明显,但改