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目的:观察人重组促红细胞生成素(rh EPO)对大鼠慢性脑缺血后行为学及神经元凋亡的影响,探索rh EPO在慢性脑缺血大鼠神经保护作用的机制。方法:将60只健康雄性SD大鼠,随机分为假手术组,2VO组(双侧颈总动脉结扎),2VO+rh EPO组,2VO+rh EPO+AG490组(JAK2的特异性拮抗剂),2VO+AG490组(n=12)。采用双侧颈总动脉结扎法(2VO)建立永久性慢性脑缺血模型。造模3天后给药,各组分别腹腔注射DMSO(AG490的溶媒)或AG490(5mg/kg),30min后鼻腔缓慢注入生理盐水或rh EPO(150U/125μl),每周1次,共8次。第8次给药结束24小时后行Morris水迷宫实验测试大鼠空间学习和记忆能力。行为学实验结束后,取标本分别进行HE染色观察神经元形态学变化;免疫组化法检测JAK2,P-JAK2(Tyr1007 1008),STAT3,P-STAT3(Tyr705),Bcl-2,Bax蛋白的表达水平;原位末端标记法(TUNEL)法检测凋亡细胞数;实时定量RT-PCR检测Bcl-2,Bax的m RNA的表达水平。结果:1.Morris水迷宫实验测试结果:评价大鼠学习并获取空间信息的能力和空间记忆能力。(1)定位航行实验:实验检测到训练期间大鼠平均速度无显著差异,且每天各组之间比较无明显差异。随着训练日期增加,5组大鼠平均逃避潜伏期明显缩短,差异具有统计学意义(F=23.648,p<0.0001);2VO+rh EPO组逃避潜伏期较2VO组明显缩短,差异有统计学意义(p<0.05),与假手术组比较差异无统计学意义(p>0.05);2VO+rh EPO+AG490组逃避潜伏期较2VO+rh EPO组延长,从第二天开始两者差异有统计学意义(p<0.05)。2VO组,2VO+rh EPO+AG490组,2VO+AG490组逃避潜伏期差异无统计学意义(p>0.05)。(2)空间探索实验:2VO+rh EPO组目标象限停留时间与穿越平台次数较2VO组均明显增加,差异有统计学意义(p<0.05),与假手术组比较差异无统计学意义(p>0.05)。2VO+rh EPO+AG490组目标象限停留时间与穿越平台次数均较2VO+rh EPO明显缩短,差异有统计学意义(p<0.05)。2VO组,2VO+rh EPO+AG490组,2VO+AG490组目标象限停留时间、穿越平台次数差异均无统计学意义(p>0.05)。2.HE染色结果显示:假手术组神经元形态学未见明显缺血性改变,细胞结构紧密,排列整齐。2VO组神经元缺失较多,残留的神经细胞边缘模糊,排列松散不规则,胞浆皱缩,边缘出现空泡,核深染,核固缩、核溶解。2VO+rh EPO组神经元形态学有轻微改变,排列较整齐。2VO组,2VO+rh EPO+AG490组,2VO+AG490组,神经元形态学改变类似。3.免疫组化及实时定量RT-PCR的结果:(1)与假手术组比较,2VO组中P-JAK2和P-STAT3表达增强,上调Bcl-2、Bax的表达(p<0.05)。(2)与2VO组比较,2VO+rh EPO组增强P-JAK2、P-STAT3蛋白的表达,并上调Bcl-2的表达和下调Bax的表达(p<0.05)。(3)与2VO+rh EPO组比较,2VO+rh EPO+AG490组可抑制EPO诱导的P-JAK2、P-STAT3的表达,下调Bcl-2的表达和上调Bax的表达(p<0.05)。(4)2VO+AG490组中P-JAK2、P-STAT3、Bcl-2、Bax的表达与2VO组和2VO+rh EPO+AG490组组间比较无统计学差异(p>0.05)。4.TUNEL结果:造模后各组阳性细胞数均较假手术组增多,各组间比较差异无统计学意义(p>0.05)。结论:rh EPO可能通过激活JAK2/STAT3信号转导通路,促进Bcl-2上调和Bax下调,减缓慢性脑缺血大鼠神经细胞凋亡,从而改善慢性脑缺血大鼠的认知功能。