骨髓间充质干细胞立体定向移植治疗大鼠脑缺血再灌注损伤的实验研究

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目的:观察立体定向移植骨髓间充质干细胞(BMSCs)治疗脑缺血再灌注模型大鼠的效果及安全性,‘并探讨其可能机制。方法:采用密度梯度离心与全骨髓贴壁法相结合体外分离BMSCs,移植前以10mg/L的BrdU标记。将SD雄性大鼠用改良线拴法制作大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,将符合神经功能缺损评分标准的50只大鼠随机分为BMSCs组、PBS组与假移植组。在造模后1w, BMSCs组通过立体定向途径将BMSCs到损伤侧纹状体,PBS组给予等体积的PBS,假移植组完成立体定向过程,但无液体注入。三组大鼠于造模后3d、1w(移植前)、治疗后1w、2w、3w、4w、2m进行mNSS评分,治疗后2w行Morris水迷宫测试。造模后2m处死大鼠取脑,做免疫组化:BrdU单染,Brdu+Nestin、Brdu+MAP-2、Brdu+GFAP、Brdu+vWF双染,MPO、 CD11染色,观察移植后BMSCs在宿主脑内存活、分化情况及免疫排斥反应。结果:1.通过密度梯度离心与全骨髓贴壁法相结合分离BMSCs,体外培养、扩增,经流式细胞仪检测,结果显示细胞表达CD90、CD71,不表达造血系细胞表面标记CD45、CD34、CD14,符合BMSCs的形态以及细胞表面标志物等特性,具有良好的自我更新能力,证实所得细胞为BMSCs;2.用线栓法制作MCAO模型后,大鼠神经功能缺损明显;TTC染色检测缺血侧纹状体、皮层呈苍白色,证实造模成功。3BMSCs组大鼠mNSS评分恢复优于PBS组、假移植组(P<0.05)。4.Morris水迷宫测试BMSCs组大鼠平均潜伏期较PBS组、假移植组明显缩短(P<0.05),跨越平台次数明显增多(P<0.05)。5.BMSCs组大鼠脑损伤中心及周围均可见BrdU单染阳性细胞及Brdu+Nestin、Brdu+MAP-2、Brdu+GFAP、Brdu+vWF双染阳性细胞,未见到CD11、MPO单染阳性细胞。结论:BMSCs可以在体外分离、扩增、传代,移植后能在大鼠脑内存活、分化,可能通过移植后细胞分化为神经元样和神经胶质细胞样细胞,并分泌或促进宿主分泌神经营养因子、促进新生血管形成等机制促进MCAO模型大鼠神经功能的恢复,该实验安全、无明显免疫排斥反应。
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