以中国棉铃虫单粒包埋核型多角体病毒（HaSNPV）-Hz细胞为实验系统，用细胞的选择性分级抽提方法、整装细胞电镜技术首先证明了Hz细胞中也存在一个精细的核骨架网络体系。同时用HaSNPV感染Hz细胞，抽提其核骨架，发现感染早期病毒的复制过程未对宿主细胞核骨架的形态结构产生明显的影响，而感染晚期多角体在核骨架网络中进行装配，但是在核骨架网络中没有观察到病毒粒子等超微结构。于是进一步采用常规树脂包埋切片技术观察经选择性分级抽提的HaSNPV感染96h的细胞核骨架结构体系，发现：病毒发生基质出现在核骨架网络中，在病毒发生基质内有大量核衣壳，在其外部的环带区，有许多病毒粒子和已装配成熟的多角体。由此可以证明多角体和病毒粒子的装配过程都利用了核骨架这个结构体系。 用细胞的选择性分级抽提方法抽提正常Hz细胞，以及感染不同时间的Hz细胞的核骨架蛋白，进行SDS-PAGE，银染，结果显示，在感染48h以后的Hz细胞核骨架蛋白中，大约32KD、30KD、29KD分子量处开始出现增强的蛋白带，由于病毒粒子的衣壳蛋白和另一种结构蛋白的分子量正好也分别是32KD、30KD，于是制备HaSNPV多角体来源型病毒（PDV）的抗体，并用硫酸铵盐析分离法进行初步提纯，用此初步提纯的抗体对感染不同时间的细胞核骨架蛋白进行Western blot检测，发现感染48h以后的细胞核骨架上结合了的病毒粒子的衣壳蛋白和另一种结构蛋白。而核骨架上是否结合多角体蛋白，还需要通过免疫学方法和Western blot方法进一步证实。 我们通过间接免疫电镜胶体金标记技术对正常Hz细胞进行标记（一抗为：anti-actin，二抗为：HRP-IgG），经透射电镜观察发现：对照无胶体金颗粒，而处理样品则发现很多胶体金颗粒，其排布无明显规律。这说明细胞核骨架上确实存在肌动蛋白成分。此外，对正常Hz细胞和感染不同时间的Hz细胞的核骨架蛋白用一抗anti-actin、二抗HRP-IgG进行Western blot分析，进一步证明Hz细胞核骨架上存在肌动蛋白成IZWepe叫 丽＋堂付个十ti弓自目／三J－j（一 丁／匕 人＼—、。、－八lAS工日RS丁H百三7〔 分，而且随着感染时间的延长，核骨架上肌动蛋白的含量似乎逐渐减少。 我们通过HaSNPV感染Hi细胞的上清液得到了HaSNPV出芽型病 毒（BV人通过碱解多角体得到了多角体来源型病毒（PDV）和核衣壳 （NC）。对这三种成分（BV、PDV、NC）进行 SDS－PAGE，Western blot 分析（一抗为 anti刁ctin ＝抗为 HRI，JgGL 结果显示，除了对照为阳性 反应外，其它的均为阴性反应，证明无论是由HaSNPV感染Hi细胞所 获得病毒粒子（BV人还是由虫体扩增得到的HaSNPV多角体经碱解得到 的病毒粒子oDV）和核衣壳（NC）可能都没有结合上肌动蛋白成分。9