目的基质重建相关分子7(MXRA7)是经生物信息学分析预测存在的基因,但尚没有对其功能的研究。课题组前期应用全基因组表达芯片和定量PCR,发现该基因mRNA在小鼠角膜新生血管模型和感染模型中均呈现时间依赖性的变化,而MMP3、MMP13等与角膜损害相关基因则呈相反变化趋势。原位杂交方法显示该基因在小鼠14.5日胎龄时在眼部特异性高表达而在其他部位基本不表达。应用基因敲除鼠技术研究该基因对小鼠眼部发育的影响,制备单克隆抗体以研究该基因在正常鼠不同阶段的表达,应用不同病理或疾病模型研究该基因的变化。通过建立WT和Mxra7-/-小鼠模型寻找影响MXRA7蛋白表达的表型,观察Mxra7基因对肝损伤修复的影响、在肿瘤新生血管中的作用及在移植瘤增长速度中的作用。方法从英国引进Mxra7基因敲除鼠之杂合子携带者三对种鼠并进行扩群,将其繁殖的子代剪鼠尾提取DNA进行遗传鉴定,确定个体是野生型(WT)、杂合敲除型(Mxra7+/-)或纯合敲除型(Mxra7-/-),将已鉴定的三种类型小鼠分别进行合笼繁殖。通过商业服务,已经由上海公司应用位点预测、合成多肽免疫的策略构建了针对小鼠Mxra7基因预测蛋白的单克隆抗体。将野生型、纯合子小鼠眼眦部放血并处死,分别取其心脏、肝脏、肺脏、脾脏、肾脏、脑和眼球组织放入4%的多聚甲醛和冷冻胶(OCT)进行固定,并将冷冻组织存放于-80℃冰箱用于提取总蛋白。分别采用免疫荧光、免疫组化技术,应用单克隆抗体进行染色,检测MXRA7蛋白的表达部位和动态变化。酶联免疫吸附试验(ELISA)的灵敏性比较高,可用来检测WT与Mra7-/-小鼠各个组织中MXRA7蛋白浓度的对比。对WT和Mxra7-/-小鼠分别进行腹腔注射四氯化碳(CCL4)形成肝损伤模型,经由腹腔注射Matrigel胶建立Matrigel模型,背部皮下注射1X106个小鼠肺癌细胞(LLC)建立移植瘤模型。结果对于合笼大量繁殖的小鼠进行DNA鉴定,确定了 WT、Mxra7+/-或Mxra7-/-厂三种个体类型;通过免疫荧光和免疫组化技术检测到心脏、肝脏、肺脏、肾脏和脑组织中都有MXRA7蛋白的表达,其中以肝脏组织中表达量最高,主要分布在一些血管壁周围和细胞间质中,在肝损伤的组织切片中MXRA7蛋白的表达主要集中在血管壁周围;在造血损伤模型中,测得血常规结果显示野生型相对纯合子敲除型血小板数量恢复快,周期短;Matrigel模型中纯合子小鼠的新生血管较野生型小鼠的新生血管少;在移植瘤模型中,Mxra7-/-组小鼠肿瘤的体积和重量比WT组小鼠的大。