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目的:肺癌在全球癌症发病率和死亡率中居首要地位。化疗是中晚期肺癌最主要的治疗手段,其中以含铂类为基础的标准化疗方案广泛应用于临床。肺癌对化疗药物的耐药常常是导致化疗失败的重要原因,其中细胞凋亡途径活性的降低是肺癌顺铂耐药的主要因素之一。缺氧作为肿瘤组织生长的重要微环境,缺氧与肿瘤的耐药性密切相关。有研究表明缺氧条件下Netrin-1促进肺癌的侵袭和转移,但Netrin-1作为一种轴突导向因子,其在肺癌耐药中作用尚不清楚。本研究通过观察Netrin-1在肺癌患者组织及化疗前后血清中的表达水平,分析其与临床资料的关系。同时通过肺癌细胞系研究缺氧条件下Netrin-1对顺铂诱导非小细胞肺癌细胞凋亡的影响,拟为肺癌化疗耐药的诊治提供新思路。方法:1.收集我院肺癌患者经手术切除的癌组织及相应癌旁组织标本30对。其中男性13例,女性17例。平均年龄61.53±8.26岁。临床分期均为I-II期。所有癌组织术后经病理检查证实为肺腺癌。另外收集肺癌患者应用化疗药物前及应用含铂类为基础的化疗药物4周期后血清标本30对。其中腺癌患者17对,鳞癌患者5对,小细胞肺癌患者8对。男性18例,女性12例。平均年龄56.60±10.73岁。22例门诊体检正常者血清标本为健康对照组,其中男性13例,女性9例,平均年龄46.64±8.03岁。2.免疫组化法及ELISA法检测Netrin-1在肺癌患者组织及血清中表达水平,分析Netrin-1与临床参数的关系。3.ELISA法检测Netrin-1在肺癌患者应用化疗药物前及应用含铂类为基础的化疗药物4周期后血清Netrin-1的表达水平,分析Netrin-1与临床资料的关系。4.Cocl2构建缺氧模型,MTT法观察常氧与缺氧状态下,肺癌A549细胞对化疗药物顺铂的敏感性。5.Si RNA构建Netrin-1低表达细胞系,Western blot验证Netrin-1表达水平。细胞凋亡实验检测常氧与缺氧状态下,Netrin-1对肺癌细胞凋亡的影响。模拟肿瘤缺氧微环境,检测Netrin-1对顺铂诱导非小细胞肺癌细胞凋亡的影响。结果:1.肺腺癌患者组织中Netrin-1蛋白阳性表达率明显高于相应癌旁组织,两组间比较差异有显著统计学意义（P<0.01）。2.肺癌患者血清中Netrin-1蛋白表达量明显高于健康对照组,两组间比较差异有显著统计学意义（P<0.01）。Netrin-1表达水平与病理类型差异具有统计学意义（P<0.05）,其中肺腺癌与小细胞肺癌间具有统计学意义（P<0.05）,肺鳞癌与肺腺癌、小细胞肺癌间无统计学意义（P>0.05）。Netrin-1表达水平与年龄、性别、吸烟史、有无淋巴结转移、临床分期无统计学意义（P>0.05）。3.肺癌患者应用化疗药物前血清Netrin-1蛋白表达量高于应用含铂类为基础的化疗药物4周期后血清Netrin-1蛋白表达量,两组间比较差异有统计学意义（P<0.05）。查阅临床资料22例肺癌患者化疗4周期后血清Netrin-1指标较前下降,疗效评价均为SD或PR（稳定或部分缓解）,继续原化疗方案治疗。2例肺癌患者化疗4周期后Netrin-1指标较前升高,疗效评价为PD（疾病进展）,予以更改化疗药物治疗。4.缺氧状态下肺癌A549细胞对顺铂药物敏感性较常氧状态相比明显降低。5.常氧状态下敲低肺癌A549细胞Netrin-1表达后,肺癌A549细胞凋亡率较空白对照组增加。实验组（Si-Netrin-1）与空白对照组（Control）间细胞凋亡率差异具有统计学意义（P<0.05）,阴性对照组（Si-NC）与空白对照组间细胞凋亡率差异无统计学意义（P>0.05）。缺氧状态下敲低肺癌A549细胞Netrin-1表达后,肺癌A549细胞凋亡率较空白对照组增加,顺铂诱导的肺癌A549细胞凋亡率较未敲低组增加。结论:本研究发现Netrin-1在肺癌患者血清和肺癌组织中表达升高,应用含铂类为基础的化疗药物4周期后,临床稳定和缓解者Netrin-1表达明显下降,有望成为一种潜在的诊断和评价化疗敏感性的标志物。Netrin-1可能通过降低顺铂诱导的细胞凋亡途径活性参与顺铂耐药过程,为干预肺癌顺铂耐药提供新思路。