牛3个候选印记基因的组织表达及印记状态分析

来源 :河北农业大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:yindanna
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基因组印记是一种不遵循孟德尔定律的遗传学现象,是指等位基因通过DNA或组蛋白的表观遗传修饰而产生的亲本基因差异表达的现象。父源等位基因沉默,而母源等位基因激活的基因称为父源印记基因;反之,母源沉默父源激活的基因称为母源印记基因。目前,印记基因的研究主要集中在人和小鼠中,被鉴定的印记基因总数超过200个,而牛中印记基因的研究相对较少,已经确认的只有34个(http://igc.otago.ac.nz/Search.html)。印记基因在染色体上成簇分布且高度保守。Cdkn1c-Kcnq1ot1印记域中的印记基因,与Beckwith-Wiedemann Syndrome和个体健康的生长发育有密切联系。  本研究选取Cdkn1c-Kcnq1ot1印记域中在鼠中被鉴定为母源表达的Cdkn1c、Phlda2和Nap1l4印记基因为研究对象,通过RT-PCR方法分析了Cdkn1c、Phlda2和Nap1l4基因在成年牛组织中的表达状态。结果表明,Cdkn1c基因在成年牛的心、肝、肺、脾、骨骼肌和脂肪6个组织表达,Nap1l4基因在成年牛的心、肝、脾、肺、肾、骨骼肌和脂肪7个组织都表达,Phlda2基因在成年牛的肝、脾、肺、肾和骨骼肌5个组织都表达。  本研究应用基于SNP(single nucleotide polymorphism,SNP)位点的测序法分析等位基因的表达。首先利用PCR产物直接测序的方法寻找Cdkn1c、Phlda2和Nap1l4基因的SNP位点,确定杂合子。在Cdkn1c基因第二外显子的129 bp位置上找到一个(C/G)SNP位点,在Nap11l4基因第十五外显子的335 bp位置上找到一个(A/T)SNP位点,在Phlda2基因第二外显子的68 bp位置上找到一个(A/T) SNP位点,通过RT-PCR产物直接测序法检测Cdkn1c、Phlda2和Nap1l4基因在杂合子牛中等位基因的特异性表达。发现Cdkn1c基因在成年牛的心、肝、肺、脾、骨骼肌和脂肪6个组织中表现为单等位基因表达,而Phlda2和Nap1l4基因在成年牛组织中呈双等位基因表达。
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