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荧光共振能量转移(FRET)是指两个荧光基团间能量通过偶极.偶极耦合作用以非辐射方式从供体传递给受体的现象,可被用于测定分子之间的距离。基于稀土荧光探针长寿命荧光特性而发展起来的高灵敏度时间分辨荧光生化分析技术已经在临床检测和生物技术领域得到了广泛的应用。在本学位论文的研究中,设计并合成了稀土离子络合物.有机染料分子荧光供受体对,并将其标记于DNA分子上,通过对供体稀土离子探针与受体常规染料分子的时间分辨荧光光谱的测定,研究DNA链中特定位点的空间距离,分析DNA的高级结构。本论文的主要研究内容及结果包括以下几个方面:
1.首先对传统有机染料供受体对进行了荧光寿命的研究,并加入表面活性剂十二烷基硫酸钠(SDS)延长染料分子的荧光寿命。
2.合成了铽.环丙沙星络合物( Tb-CIP),并与罗丹明B组成了供受体对,使用时间分辨荧光光谱技术对其荧光寿命进行了研究。
3.合成了罗丹明B-N-羟基琥珀酰亚胺酯(RB-SE),通过红外光谱、紫外光谱、荧光光谱以及熔点的测定对其性质进行了表征,并将其作为本论文中选择的受体。
4.合成了铽.二乙三胺五乙酸.对氨基水杨酸络合物( Tb-DTPA-pAS),对其进行了吸收光谱、荧光光谱、激发光谱和时间分辨荧光光谱的测定,并将其作为本实验的供体。
5.本论文合成了稀土离子探针和易于标记的染料分子( RB-SE),并将其标记于不同长度的寡核苷酸互补链上,通过时间分辨荧光技术测定了杂交前后供体DNA链的荧光寿命,从而获得了寡核苷酸5端和3端之间的相对距离,为运用FRET方法研究DNA、蛋白质分子的空间结构提供了研究基础。