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本研究的目的是探讨癌基因mdm2(murinedoubleminute-2)对大肠癌细胞生长、增殖等生物学特性的影响。
方法:应用RNAi技术将mdm2基因在结肠癌低分化细胞系LoVo中的MDM2蛋白表达封闭,并进行体外试验及表达检测。
结果:在大肠癌细胞系的研究中,应用RT-PCR检测mdm2siRNA转染后的LoVo细胞中mdm2基因mRNA表达水平明显减低。由Westernblot检测可见mdm2siRNA转染前后的LoVo细胞中MDM2蛋白表达水平明显减低,与RNA表达水平减低程度相近;在体外实验中,从细胞生长曲线的第1天起,转染mdm2siRNA的LoVo细胞增殖减缓出现明显的生长差别;流式细胞计数仪检测结果24h后凋亡细胞百分数增加了16.72%;应用细胞毒药物后的效果分析中MTT结果显示,细胞转染48h后加入顺铂,细胞抑制率随药物浓度的增加而增加,对照组对药物的细胞半数抑制浓度是mdm2RNA干扰后的5.33倍。
结论:RNAi技术能够阻断mdm2基因的表达,抑制LoVo细胞的增殖;RNA干扰后LoVo细胞对细胞毒药物敏感性增加;RNA干扰沉默mdm2,在临床结直肠癌的基因治疗中可能作为一个可选择的靶点和方法。