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目的rs4644是galectin-3基因编码区的单核苷酸多态(single nucleotide polymorphism,SNP)位点,该位点处等位基因C被A所替换,导致galectin-3蛋白序列的第191位的氨基酸由脯氨酸(P)变为组氨酸(H)。从而影响galectin-3的生物学行为。本研究旨在通过分析rs4644在乳腺癌患者中的分布情况,探讨rs4644与中国女性乳腺癌发生、发展的关系。聚腺苷酸二磷酸核糖核苷酸聚合酶-1(poly(ADP-ribose)polymerase-1,PARP-1)是一种DNA损伤修复酶,它可以催化合成聚腺苷酸二磷酸核糖(pol(ADP-ribose),PAR),参与DNA损伤的修复过程。PAR可以反映细胞内PARP-1活性,被认为是一种潜在的预测PARP-1抑制剂治疗敏感性的生物标记分子。rs1136410是PARP-1单核苷酸多态性位点(single nucleotide polymorphism,SNP),它可以影响PARP-1活性。虽然PARP-1抑制剂在三阴性乳腺癌治疗已经进入Ⅲ期临床试验,但是可靠的评估PARP-1抑制剂治疗敏感性的生物标记分子是缺乏的。因此,我们的实验旨在分析PAR在三阴性和非三阴性乳腺癌的表达差异以及PARP-1活性位点rs1136410与PAR表达的相关性。方法应用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)方法检测172例乳腺癌患者冻存肿瘤组织和17例新鲜良性乳腺组织rs4644基因型,随机选取10例PCR样本测序,验证PCR-RFLP的实验结果。使用PAR抗体(MA1-90439 10H Thermo),运用免疫组织化学染色的方法检测32例三阴性以及39例非三阴性乳腺癌的石蜡固定标本,并同时提取相对应病例的冻存组织的基因组DNA,检测rs1136410等位基因的位点差异。结果1.PCR产物经NCOI酶切后,野生纯合子(CC)型为324bp一条带;杂合子(CA)型为324bp、171bp和153 bp三条带;突变纯合子(AA)为171、153双条带。由于2%琼脂糖凝胶电泳无法分辨171bp和153bp条带,仅显示160bp左右融合条带(图1)。随机抽取10例PCR产物测序结果与电泳一致。2.乳腺癌组基因型分布为CC型125例(72.7%),CA型43例(25.0%),AA型4例(2.3%);C、A等位基因频率分别为293(85.2%),51(14.8%);对照组基因型分布为CC型9例(52.9%),CA型7例(41.2%),AA型1例(5.9%);C、A等位基因的频率分别为25(73.5%),9(26.5%)。两组基因型及等位基因频率分布均无明显统计学差异。3.rs4644 A等位基因更容易出现在肿物T>2cm及ki-67<14%的乳腺癌人群(P<0.05),而与患者年龄,组织学分级,淋巴结转移,受体状态及p53表达无明显相关性。4.免疫组化染色结果显示PAR呈现不同的细胞定位着色,大部分病例为强-中等的细胞核着色,另一部分病例为中等细胞质着色,PAR的着色特点与我们之前报道PARP-1着色定位相似。5.在三阴性乳腺癌中,62.5%的病例表现为胞核PAR低表达,而37.5%的病例表现为胞核PAR高表达;与此相反,在非三阴性乳腺癌中,仅28.2%病例表现为核PAR低表达,而71.8%的病例表现为核PAR高表达。统计学分析显示在非三阴性乳腺癌中,核PAR高表达比例明显高于三阴性乳腺癌(?2=8.404,P=0.004)。6.胞质PAR表达的阳性比例与阴性比例在三阴性乳腺中均为50%;在非三阴性乳腺癌中,20.5%病例表现为胞质PAR的阳性表达,79.5%的病例表现为阴性表达;三阴性乳腺癌胞质PAR的阳性表达明显高于非三阴性乳腺癌(?2=6.830,P=0.009)。7.不考虑是三阴性还是非三阴性乳腺癌来源,我们整体比较核PAR和胞质PAR表达的相关性,分析结果显示,46.5%的病例表现为核PAR高表达而胞质PAR阴性表达;23.9%病例表现胞质PAR阳性表达而核PAR低表达。统计学分析显示胞质PAR与核PAR表达成负相关(r=-0.391,P=0.001)。8.细胞内PAR的水平可能会依赖于PARP-1表达高低,基于这一假设,我们分析PAR与PARP-1表达的关系(PARP-1的表达已在之前文章报道),分别比较二者胞核和胞质表达发现,11.3%病例表现为核PAR高表达而核PARP-1低表达,24.0%病例表现为核PARP-1高表达而核PAR低表达(P=0.054);21%病例表现为胞质PAR阳性表达而胞质PARP-1阴性表达,12.7%病例表现为胞质PARP-1阳性表达而胞质PAR阴性表达(P=0.448)。无论是胞质还是胞核表达,均未发现PAR与PARP-1表达的明显的相关性。9.分别比较胞质PAR及胞核PAR表达与rs1136410基因型以及等位基因频率之间关系,未见明显的相关性。结论1.Galectin-3基因191位基因多态性rs4644与乳腺癌的发生无明显相关性,其与肿瘤大小及ki-67密切相关,提示rs4644在肿瘤生长及耐药过程中发挥一定生物学功能。2.三阴性乳腺癌更常表现为胞质PAR阳性表达而核PAR低表达模式,然而,非三阴性乳腺癌中,核PAR高表达则更为常见;胞质PAR和胞核PAR表达之间呈负相关的关系;PAR水平与PARP-1表达无明显相关性;PAR水平与rs1136410无明显相关性。