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目的:1、研究Annexin II在人乳腺癌组织以及人乳腺癌细胞株(MDA-MB-435s、MDA-MB-231、ZR-75-30、MCF-7)的表达情况,阐明Annexin II及s100A10的表达与人乳腺癌侵袭力的关系。2、探讨Annexin II -siRNA沉默Annexin II基因表达对MDA-MB-435s细胞s100A10、c-Myc表达的影响。3、探讨Annexin II -siRNA沉默Annexin II基因表达对MDA-MB-435s细胞的增殖、细胞周期及侵袭力的影响。方法:1、采用免疫组织化学方法检测正常人乳腺组织、导管原位癌及侵袭性导管癌组织中Annexin II及s100A10蛋白的表达情况;Millicell小室测定4株人乳腺癌细胞(MDA-MB-435s、MDA-MB-231、ZR-75-30、MCF-7)体外侵袭力;用RT-PCR、蛋白印迹技术分别检测高侵袭性人乳腺癌细胞(MDA-MB-435s、MDA-MB-231、ZR-75-30)与低侵袭性人乳腺癌细胞(MCF-7)中Annexin II与s100A10 mRNA和蛋白的表达情况。2、体外化学合成针对Annexin II序列的特异性双链小RNA;以高表达Annexin II的人乳腺癌细胞株MDA-MB-435s为研究对象,脂质体2000介导转染MDA-MB-435s,采用荧光显微镜观察转染效率;分别收集对照组、实验组细胞,实时荧光定量PCR、蛋白印迹和免疫荧光技术分别检测干扰前后Annexin II、s100A10和c-Myc的变化。3、采用MTT法、流式细胞术与Millicell小室分别检测干扰前后细胞增殖活性、细胞周期及细胞侵袭力的变化。结果:1、免疫组化结果显示正常乳腺组织上皮细胞未见Annexin II与s100A10表达;相反地,Annexin II与s100A10高表达在导管原位癌及侵袭性乳腺癌上皮细胞(P<0.01);且Annexin II与s100A10表达水平与乳腺癌侵袭特性呈正相关。RT-PCR、蛋白印迹显示高侵袭性人乳腺癌细胞(MDA-MB-435s、MDA-MB-231、ZR-75-30)中Annexin II与s100A10 mRNA及蛋白水平显著高于低侵袭性人乳腺癌细胞MCF-7(P<0.01);且Annexin II与s100A10表达水平与乳腺癌细胞侵袭性呈正相关。激光共聚焦显微镜观察显示Annexin II与s100A10共定位于乳腺癌细胞胞浆与细胞膜;荧光强度与细胞侵袭力呈正相关;而两者定位分布与侵袭力无关。2、与空白对照组及阴性对照组细胞比较,经Annexin II -siRNA处理的MDA-MB-435s细胞,Annexin II mRNA和蛋白的表达水平显著降低(P<0.05);且伴有s100A10与c-Myc蛋白水平明显降低(P<0.05),但s100A10 mRNA水平无显著性变化(P>0.05)。3、与空白对照组与阴性对照组比较,经Annexin II -siRNA转染24h的MDA-MB-435s细胞,增殖无明显变化(P>0.05),而在转染48～96h时,其增殖能力明显减低(P<0.05);经Annexin II -siRNA转染48h时,实验组细胞G0/G1期明显增加(P<0.05),S期细胞明显减少(P<0.05);实验组细胞侵袭力明显降低(P<0.05)。结论:1、Annexin II与s100A10高表达在乳腺癌组织及高侵袭性乳腺癌细胞中;且其表达水平与侵袭性呈正相关。2、采用siRNA技术沉默MDA-MB-435s Annexin II后,细胞s100A10、c-Myc表达显著降低;且能有效抑制乳腺癌细胞的增殖和侵袭力。3、Annexin II可能是一重要的促进乳腺癌发生发展的调控因子。