目的:通过HE+阿尔新蓝复染、甲苯胺蓝染色、藏红固绿染色组织形态学观察及免疫组化方法检测Fas和FasL基因的表达,探讨骨痹合剂干预大鼠膝骨性关节炎模型的部分影响机制。通过临床问卷调查研究膝骨性关节炎X线不同分级与髋骨性关节炎发病的相关性。方法:实验部分:去双前肢直立联合Hulth法大鼠KOA模型是一种已被证实的简便、可靠、成功率高、类似于人类KOA发病机理的动物KOA模型[1-4]。用孕期15日的SD大鼠12只,平均分配后放入不同的笼内饲养,待幼鼠出生。幼鼠出生第10天,把80只幼鼠,按体重大小排序后随机分成四组:空白对照组(去双前肢直立联合Hulth法大鼠KOA模型组)、生理盐水组、氨糖美辛组、骨痹合剂组,每组20只,每组中再均分为两组分别为6月龄和9月龄。所有实验幼鼠均在腹腔麻醉下手术去除双前肢,术后放于笼内饲养。各组均在去除双前肢术后四月行右膝Hulth法手术。6月龄大鼠在第二次术后1月开始给予药物干预。空白对照组SD大鼠仅予正常饮食;生理盐水组SD大鼠除正常饮食外,予生理盐水10mL/kg/d进行灌胃,分8点、18点各1次。氨糖美辛组SD大鼠除正常饮食外,予氨糖美辛肠溶片10mg/kg/d,置于同体积的蒸馏水中待其融化摇匀后,分8点、18点各一次灌胃。骨痹合剂组SD大鼠除正常饮食外,予骨痹合剂10mL/kg/d,分8点、18点各1次灌胃,持续4周时间为干预过程。9月龄大鼠在第二次术后4月开始给予药物干预。药物干预过程及持续时间同6月龄大鼠。分别在6月龄、9月龄两个时间点,在腹腔麻醉成功后处死实验大鼠,对全膝关节进行取材,膝关节经过固定、脱钙、脱水、包埋制备蜡块标本,蜡块经过切片、展片、捞片、烤片制作石蜡切片,对石蜡切片进行特殊染色,包括:he+阿尔新蓝复染、甲苯胺蓝染色、藏红固绿染色。在光学显微镜下观察各组膝关节组织形态特征并选取特定部位进行采片,组织形态学观察的同时,将各组大鼠膝关节软骨组织按mankin评分标准进行评分、统计分析。同时对石蜡切片通过免疫组化技术检测去双前肢直立联合hulth法大鼠膝骨性关节炎模型各组膝关节组织fas和fasl基因的表达,光学显微镜同倍数视野下观察和计数各组膝关节组织阳性的细胞数目,并选取特定部位进行采片,采用spss17.0统计软件对结果进行统计、分析后得出结论。临床部分:通过调查问卷将符合纳入标准的膝骨性关节炎和(或)髋骨性关节炎患者进行x线分级、体格检查及填写调查问卷,对调查问卷数据进行整理,采用spss17.0统计软件对结果进行统计分析。使用卡方检验,spearman等级相关系数来度量分析膝关节骨性关节炎x线分级与髋关节发病症状之间的相关性。结果:1、从各种特殊染色的组织形态学观察后认为:无论6月龄还是9月龄,与其他组(空白对照组、生理盐水组、氨糖美辛组)对比软骨细胞的退变程度最轻的是骨痹合剂组。2、6月龄骨痹合剂组与另外三组(空白对照组、生理盐水组、氨糖美辛组)比较,p<0.01,可以认为骨痹合剂组与另外三组之间存在显著性差异;6月龄关节软骨mankin评分最低的是骨痹合剂组,总值为50,?x=5.0。因此认为6月龄骨痹合剂组中关节软骨的退变较另外三组(空白对照组、生理盐水组、氨糖美辛组)轻,骨痹合剂可延缓koa病变的发展。3、9月龄骨痹合剂组与另外三组(空白对照组、生理盐水组、氨糖美辛组)比较,p<0.01,可以认为骨痹合剂组与另外三组之间存在显著性差异;9月龄关节软骨mankin评分最低的是骨痹合剂组,总值为68,?x=6.8。因此认为9月龄骨痹合剂组中关节软骨的退变较另外三组(空白对照组、生理盐水组、氨糖美辛组)轻,骨痹合剂可延缓koa病变的发展。4、6月龄骨痹合剂组与另外三组(空白对照组、生理盐水组、氨糖美辛组)比较,p<0.01,可以认为骨痹合剂组与另外三组之间存在显著性差异;6月龄关节软骨fas阳性细胞表达最低的是骨痹合剂组。因此认为6月龄骨痹合剂组中关节软骨的退变较另外三组(空白对照组、生理盐水组、氨糖美辛组)轻,骨痹合剂可延缓koa病变的发展。5、9月龄骨痹合剂组与另外三组(空白对照组、生理盐水组、氨糖美辛组)比较,p<0.01,可以认为骨痹合剂组与另外三组之间存在显著性差异;9月龄关节软骨fas阳性细胞表达最低的是骨痹合剂组。因此认为9月龄骨痹合剂组中关节软骨的退变较另外三组(空白对照组、生理盐水组、氨糖美辛组)轻,骨痹合剂可延缓koa病变的发展。6、6月龄骨痹合剂组与另外三组(空白对照组、生理盐水组、氨糖美辛组)比较,p<0.01,可以认为骨痹合剂组与另外三组之间存在显著性差异;6月龄关节软骨fasl阳性细胞表达最低的是骨痹合剂组。因此认为6月龄骨痹合剂组中关节软骨的退变较另外三组(空白对照组、生理盐水组、氨糖美辛组)轻,骨痹合剂可延缓koa病变的发展。7、9月龄骨痹合剂组与另外三组(空白对照组、生理盐水组、氨糖美辛组)比较,p<0.01,可以认为骨痹合剂组与另外三组之间存在显著性差异;9月龄关节软骨fasl阳性细胞表达最低的是骨痹合剂组。因此认为9月龄骨痹合剂组中关节软骨的退变较另外三组(空白对照组、生理盐水组、氨糖美辛组)轻,骨痹合剂可延缓koa病变的发展。8、符合纳入标准并完成调查的321例患者中,男性患者的发病率明显低于女性患者,约是女性患者的1/4;发病患者以中老年为主;汉族占比是98.75%。性别、年龄、体重、外伤史、手术史可能是诱发膝骨性关节炎的因素。结果与koa的临床发病因素和特点相符合;9、通过对专科诊断、膝骨性关节炎x线分级、发病部位进行统计分析,认为膝骨性关节炎患者中大部分双膝发病,存在膝骨性关节炎与髋关节骨性关节炎均发病的现象;膝骨性关节炎患者的x线分级、发病部位无明显特异性,左右膝关节发病几率和左右膝关节x线分级所占比例无明显差别。10、通过对koa患者x线分级与左、右髋关节疼痛,僵硬感时间,屈曲活动功能,x线片报告结果,左、右腿翘二郎腿功能的相关性分析后可以看出:膝骨性关节炎x线不同分级与左、右髋关节疼痛,屈曲活动功能,x线片报告结果,左、右腿翘二郎腿功能存在相关性;其与左、右髋关节僵硬感时间不存在相关性。因此认为:膝骨性关节炎X线分级与髋关节疼痛,屈曲活动功能,X线片报告结果,左、右腿翘二郎腿功能发病症状存在相关性;其与左、右髋关节僵硬感时间发病症状不存在相关性。结论:1、无论6月龄还是9月龄骨痹合剂组与其他组(空白对照组、生理盐水组、氨糖美辛组)比较,关节软骨退变的形态学程度最轻、Mankin评分最低的是骨痹合剂组,骨痹合剂可延缓KOA病变的发展。2、无论6月龄还是9月龄骨痹合剂可能通过下调Fas、FasL基因的表达的机制延缓KOA病变的发展。3、男性患者的发病率明显低于女性患者,约是女性患者的1/4;发病患者以中老年为主;汉族占比是98.75%。性别、年龄、体重、外伤史、手术史可能是诱发膝骨性关节炎的因素。结果与KOA的临床发病因素和特点相符合;4、膝骨性关节炎患者中大部分双膝发病,存在膝骨性关节炎与髋关节骨性关节炎均发病的现象;左右膝骨性关节炎患者的X线分级、发病部位无明显特异性,左右膝关节发病几率和左右膝关节X线分级所占比例无明显差别。5、膝骨性关节炎X线不同分级与左、右髋关节疼痛,屈曲活动功能,X线片报告结果,左、右腿翘二郎腿功能存在相关性;其与左、右髋关节僵硬感时间不存在相关性。因此认为:膝骨性关节炎X线分级与髋关节疼痛,屈曲活动功能,X线片报告结果,左、右腿翘二郎腿功能发病症状存在相关性;其与左、右髋关节僵硬感时间发病症状不存在相关性。在膝骨性关节炎患者中,髋关节症状严重程度与膝关节症状严重程度成正相关关系,同侧髋关节比异侧髋关节的相关性更高。