高效氯氰菊酯(β-cyp)属于拟除虫菊酯类农药,现被广泛使用于农业生产中。动物研究表明该农药对精子数量、形态和运动能力有损伤作用,人群资料也进一步显示其对男性生殖系统存在潜在性危害。高效氯氰菊酯是重要的环境内分泌干扰物,其致雄(男)性生殖毒性的毒作用机制较为复杂,可能与雄激素受体(AR)介导的信号通路有关。受体报告基因实验也称受体转录激活试验,是EPA推荐的用于环境内分泌干扰物(EDCs)筛选的in vitro方法之一。研究表明,这种方法即可检测化学物与受体结合的能力,又可检测结合后引起的生物学效应,而且能够区分激动剂和拮抗剂,与受体结合试验相比可提供更多的信息,因此成为EDCs筛选的有力工具。本研究将动物实验和受体报告基因试验结合,阐明β-cyp的抗雄激素效应及其作用机制,为揭示拟除虫菊酯类农药的抗雄激素效应机制提供重要依据,并为其他化学物质的研究提供新的思路和技术平台。　　 第一部分高效氯氰菊酯对成年雄性大鼠生殖系统的影响　　 目的:选择高效氯氰菊酯(β-cyp)为研究对象,研究其对雄性生殖系统的损伤作用及机制。　　 方法:选择成年雄性啮齿类动物15天染毒试验,按体重将30只成年雄性SD大鼠随机分为中、低剂量和对照共三组,每组10只。中、低剂量组灌胃量分别按30 mg和15 mgβ-cyp/kg BW灌胃15天,对照组则每天给与同体积玉米油。15天后称大鼠终重并处死,将睾丸、附睾和精囊取出分别称重。一侧睾丸用于精子头计数实验,另一侧睾九通过对其做免疫组化实验来观测雄激素受体(AR)的表达。　　 结果:与对照组相比,给药组的精子头计数和每日精子生成量明显减少,且AR水平也显著降低,三个组的灰度值分别为113.79±13.58、96.09±5.95和77.27±5.44,差异有统计学意义。　　 结论:β-cyp对雄性生殖系统是有损伤作用的,抑制AR的表达可能是其引起精子数下降的重要机制之一。　　 第二部分高效氯氰菊酯的雄激素受体报告基因试验研究　　 目的:通过AR报告基因试验检测β-cyp是否是AR拮抗剂。　　 方法:建立以氯霉素乙酰转移酶(CAT)为报告基因的雄激素受体(AR)报告基因试验。将表达AR的质粒AR/pcDNA3.1、重组报告基因质粒pMMTV-CAT和阳性对照质粒pSV-β-Gal共转染非洲猴肾细胞株CV-1,以5α-双氢争酮(5α-DHT)为阳性对照。CV-1转染后用高效氯氰菊酯(β-cyp)染毒,通过检测该物质作用下CAT的蛋白表达水平,间接反应内源性基因的表达情况,进一步确定β-cyp与内源性雄激素竞争结合AR的能力。　　 结果:β-cyp在10-7 M-10-5M的浓度范围内能拮抗1 nM的5α-DHT诱导的CAT的表达,并且在浓度为1×10-5 M时对5α-DHT的拮抗作用较明显,其IC50为(6.80±2.30)×10-5M。　　 结论β-cyp属于AR拮抗剂,是通过抑制AR的正常功能产生抗雄激素效应。