论文部分内容阅读
目的：糖尿病(Diabetes mellitus，DM)是一类以血糖升高为表现的全身代谢性疾病。动脉粥样硬化是糖尿病的并发症之一。糖尿病并发动脉粥样硬化的早期信号可能与内皮细胞功能紊乱有关。晚期糖基化终产物(Advanced glycation end products，AGEs)的累积与糖尿病血管并发症密切相关。高糖情况下，AGEs在体内堆积过多，与受体结合后激活氧化应激反应，使细胞凋亡增加。绿原酸是(Chlorogenic acid，CGA)是一种广泛存在于自然界的酚酸化合物。CGA具有众多生物学活性，包括抗炎，抗氧化。但目前，CGA在炎症和肿瘤发生中的相关机制大部分仍然未知。这促使我们学习和探究其抗血管活性，包括可能的分子机制。以AGEs诱导的人脐静脉内皮细胞为研究模型，从细胞凋亡的形态学改变，细胞凋亡率，细胞活性，细胞内活性氧的改变等方面，探讨绿原酸对晚期糖基化终产物诱导的体外培养的人脐静脉内皮细胞凋亡的抑制作用，并进一步探讨可能的作用机制。 方法：⑴传代培养人脐静脉内皮细胞株(HUVECs):用含10％胎牛血清的培养基培养HUVECs，取指数生长期细胞进行实验。⑵分组:将细胞随机分为200 mg/L BSA组，200mg/L AGEs组，15mg/L CGA+200mg/L AGEs组，25mg/LCGA+200mg/LAGEs组。⑶应用MTT法检测HUVECs活性，采用Hoechst染色法在荧光显微镜下观察细胞形态学改变，应用AnnexinⅤ-FITC/PI双标记法检测细胞凋亡率，应用ROS探针技术通过流式细胞仪检测活性氧水平以反映HUVECs内氧化应激水平。 结果：①MTT法检测的结果显示，与BSA组细胞相比，AGEs组细胞存活率显著下降且有统计学意义;同时，15、25mg/L CGA+AGEs组与AGEs组相比细胞活力明显升高。②应用Hoechst-33258染色检测，显示与BSA组相比，AGEs组细胞的细胞核致密浓染，可以见到碎裂的颗粒型荧光，即出现细胞凋亡的明显的核碎裂、染色质固缩现象。经过CGA预处理后，核碎裂、核固缩明显减轻。③应用流式细胞仪检测HUVECs凋亡率，显示与BSA组相比， AGEs组细胞凋亡率显著上升，经过CGA预处理组细胞凋亡率与AGEs相比明显减轻。④ROS活性氧检测，与BSA组相比，AGEs组的ROS明显增多，用15、25mg/L CGA预处理HUVECs后，与AGEs组相比ROS明显降低，差异均有统计学意义。 结论：⑴AGEs可以损伤血管内皮细胞，抑制内皮细胞的活性，促进内皮细胞凋亡。⑵CGA可部分抑制AGEs诱导的血管内皮细胞凋亡的损伤作用，其效应可能与NF-κB等氧化应激通路有关，尚需进一步实验探讨。