本文构建了两种能靶向作用于端粒酶hTERTmRNA序列的质粒载体，一种是含正义链和反义链的siRNA载体，另一种是含发夹状的shRNA载体。为了观察含正义链和反义链的siRNA载体对hTERTmRNA的靶向抑制效应，将实验分为如下四组：①正常Hela细胞组；②空质粒(pcDNA3.1)组；③非特异性siRNA组(pU6-bcl2)；④特异性siRNA实验组(psiRNATE)。类似地，为了观察含发夹状的shRNA载体对hTERTmRNA的靶向抑制效应，将实验分为如下五组：①正常Hela细胞组；②空质粒(pSilencerneo)组；③非特异性shRNA组(pU6-bcl2)；④特异性U6启动子shRNA实验组(pU6-TERT)；⑤特异性H1启动子shRNA实验组(pH1-TERT)。将它们分别导入Hela细胞中，观察并比较其对Hela细胞产生hTERT基因表达的干扰效果。主要研究结果如下： 1.为了了解siRNA对Hela细胞中hTERT基因的抑制效应，首先构建了一种质粒载体，它能内部产生靶向作用于hTERTmRNA的含19-nts的siRNA，用lipofectamin2000将该载体转染入Hela细胞中，通过G418筛选出阳性克隆细胞。再用兔抗人hTERT多克隆抗体及异硫氰酸荧光素(fluoresceinisothiocynate，FITC)荧光标记的羊抗兔二抗进行荧光标记，荧光倒置显微镜观察结果表明：经siRNA载体转染过的Hela细胞中含hTERT蛋白的阳性克隆细胞百分数(38.32％)少于对照组(Hela组：95.45％；pcDNA3.1组：78.69％；PU6-bcl2组：47.51％)，但抑制效果不够稳定和持久。 2.为了得到稳定持久地抑制hTERT表达的质粒载体，又进一步改进方法，构建了两种shRNA载体，一种是以U6作为启动子，另一种是以H1作为启动子。该两种质粒载体分别命名为pU6-TERT和pH1-TERT，将它们同样转染入Hela细胞中，通过G418筛选出阳性克隆细胞，同上的方法进行荧光标记，结果pU6-TERT细胞系组(18.54％)和pH1-TERT的细胞系组(6.78％)其表达hTERT的阳性细胞百分数比对照组明显减少(Hela组：85.76％；pSilencerneo组：75.47％；PU6-bcl2组：67.43％)。此外对转染的质粒进行长效培养，分别在15d、30d、60d三个时间段将各组细胞分别铺1×105个细胞于无菌培养皿中，培养36h后进行免疫荧光检测。通过激光共聚焦显微镜观察，发现在不同的时间段pH1-TERT细胞系组的抑制效应都比pU6-TERT强。说明干涉质粒能较长时间稳定抑制hTERT基因的表达。