【摘 要】
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目的探讨蒙药当贡-3(DG-3)对大鼠缺氧/复氧(Hypoxia/Reoxygenation,H/R)心肌细胞活性影响的研究。方法将DG-3复方药物进行提取得药物总提物,体外培养H9c2心肌细胞,给予细胞DG-3药物干预,以复方丹参滴丸(FF)为阳性对照组,选用Co Cl_2溶液为缺氧剂,噻唑蓝(MTT)检测细胞存活率,验证药物的毒性作用及筛选药物浓度,优化H/R条件,在体外模拟心肌缺血-再灌注损
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目的探讨蒙药当贡-3(DG-3)对大鼠缺氧/复氧(Hypoxia/Reoxygenation,H/R)心肌细胞活性影响的研究。方法将DG-3复方药物进行提取得药物总提物,体外培养H9c2心肌细胞,给予细胞DG-3药物干预,以复方丹参滴丸(FF)为阳性对照组,选用Co Cl2溶液为缺氧剂,噻唑蓝(MTT)检测细胞存活率,验证药物的毒性作用及筛选药物浓度,优化H/R条件,在体外模拟心肌缺血-再灌注损伤(Myocardial Ischemia-Reperfusion Injury,MIRI)模型。将心肌细胞随机分为6组:空白对照组(control)、缺氧/复氧损伤组(H/R)、DG-3低、中、高剂量组(H/R+低、中、高相应浓度剂量的DG-3)、FF剂量组(H/R+相应浓度剂量的FF),通过MTT法检测细胞存活率,试剂盒检测细胞匀浆液中过氧化氢酶(Catalase,CAT)的水平、细胞上清液中乳酸脱氢酶(Lactate Dehydrogenase,LDH)以及肌酸激酶(Creatine Kinase,CK)的释放量,实时-荧光定量PCR技术(Real-time Quantitative,Rt-q PCR)检测Bax、Bcl-2、caspase-3 m RNA的水平。结果1.MTT结果得出,DG-3药物浓度在0.05-0.4mg/m L范围内,细胞存活率无明显改变,组间无统计学意义(P>0.05),DG-3药物浓度在0.8-6.4mg/m L内,细胞存活率降低(P<0.05),筛选DG-3低、中、高药物浓度分别为0.1、0.2、0.4mg/m L。2.依据心肌细胞的存活率,确定H/R模型的最佳条件为Co Cl2的浓度为1000mmol/L,缺氧时间21 h,复氧时间2 h。3.与control对比,H/R细胞存活率下降(P<0.05),细胞匀浆中的CAT水平降低(P<0.05),细胞上清液中LDH及CK的释放量升高(P<0.05),Bax、caspase-3的m RNA水平升高(P<0.05),Bcl-2的m RNA水平降低(P<0.05)。与H/R对比,DG-3中、高剂量组能够升高细胞存活率(P<0.05)、降低细胞上清液中LDH及CK释放量(P<0.05)、升高细胞匀浆中CAT的活性(P<0.05),低、中、高剂量组能够降低Bax、caspase-3的m RNA表达水平(P<0.05)、升高Bcl-2的m RNA表达水平(P<0.05),并且作用可以呈现出浓度依赖性。结论DG-3总提取物能够抑制由Co Cl2诱导的H/R而出现的心肌细胞凋亡,其保护机制可能与DG-3能够降低Bax、caspase-3的m RNA水平,升高Bcl-2的m RNA水平有关。
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