沉默ATF5对卵巢癌细胞skov-3裸鼠成瘤的研究

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目的:分析慢病毒转染沉默人转录激活因子5(Activating transcription factor5, ATF5)后,对卵巢癌SKOV-3细胞体外增殖、凋亡及体内成瘤的影响,通过体外和体内的实验研究来探讨卵巢癌的基因治疗,探索沉默ATF5的表达后,能否开辟卵巢癌治疗的新方法。方法:1、慢病毒携带小干扰RNA,分别将构建好的携带RNA干扰质粒(沉默ATF5)和空载体的慢病毒感染生长良好的卵巢癌SKOV-3细胞和卵巢癌SKOV-3细胞进行对照,对比观察细胞的生长状态。2、MTT法检测细胞的增殖生长。3、罗氏凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡。4、采用裸鼠皮下接种细胞的方法,于裸鼠皮下接种成瘤,观察各组裸鼠的存活状态、种植瘤生长情况,进一步计算成瘤率。5、RT-PCR检测移植瘤ATF5mRNA的表达情况。6、Western-Blot检测移植瘤ATF5蛋白的表达情况。7、HE染色观察瘤组织组织学变化。结果:1、在体外培养条件下,SKOV-3的生物学形态没有明显差异。在相同培养时间内细胞的增殖无统计学意义,但RNA干扰的实验组细胞凋亡数量较其他两组明显增多。2、皮下接种成瘤后,三组裸鼠的成瘤率没有明显区别,但RNA干扰组肿瘤成瘤时间晚,生长缓慢。3、移植瘤组织RT-PCR显示RNA干扰组mRNA表达量与其他对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);4、瘤组织Western-Blot显示RNA干扰组ATF5蛋白表达差异有统计学意义(P<0.05);5、HE染色法观察RNA干扰组分裂相明显减少,凋亡现象明显。结论:沉默ATF5的表达后人上皮性卵巢癌裸鼠移植瘤生长缓慢,这可能成为卵巢癌基因治疗的新靶点。
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