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背景：
间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)是具有高度自我更新能力和多向分化潜能的非造血多能干细胞，广泛存在于全身多种组织中，可在体外培养扩增，并能在特定条件下分化为神经细胞，成骨细胞，软骨细胞，心肌细胞，脂肪细胞等，是细胞替代治疗和组织工程的首选种子细胞，具有广阔的临床应用前景。此外，间充质干细胞是一类免疫缺陷细胞，具有低免疫源性和免疫调节特性，主要通过细胞间接触和可溶性因子的分泌发挥免疫抑制功能，是移植领域和自身性免疫疾病治疗的研究热点。Toll样受体(Toll-like receptors，TLRs)是目前研究最为深入的一种模式识别受体(pattern recognition receptor,PRR)，主要表达于免疫细胞表面，可对病原相关分子模式（pathogen associated molecular patterns，PAMPs）进行识别，结合，并引发一系列信号转导，进而导致炎性介质的释放，在先天性免疫和获得性免疫中均发挥重要作用。它们不仅参与病原微生物免疫应答的信号传导过程，抵抗病毒，细菌及寄生虫等病原微生物的感染，同时也参与肿瘤免疫，自身免疫性疾病和超敏反应。近年来研究表明，间充质干细胞也表达有多种功能性的TLRs，而且不同组织来源的间充质干细胞表达TLRs的情况不同，TLRs信号通路的活化可能影响其增殖，分化，迁移和免疫抑制功能，但确切的作用还有待进一步的阐明。
目的：
脐带来源的间充质干细胞具有取材方便，无伦理学限制，免疫原性低，增殖能力和免疫抑制能力强等明显优势，有可能成为最具有临床应用前景的多能干细胞。本研究旨在观察脐带间充质干细胞中TLRs的表达情况，揭示TLRs的激活对脐带间充质干细胞增殖，分化，免疫调节能力的影响，为人脐带间充质干细胞的临床应用提供必要的理论基础。
方怯：
(1)应用Real-time PCR方法及流式细胞术分别检测人脐带间充质干细胞中TLRs的mRNA水平和蛋白水平的表达情况。
(2)共聚焦荧光显微镜，Western Blot方法检测TLRs配体刺激脐带间充质干细胞后转录因子NF-кB的活化情况，并用Real-time PCR方法检测TLRs配体刺激后脐带间充质干细胞细胞中细胞因子mRNA表达水平的变化情况，从而明确脐带间充质干细胞中表达的TLRs是否具有功能性。
(3)TLRs特异性配体刺激脐带间充质干细胞，采用CCK8试剂盒检测脐带间充质干细胞的增殖情况。
(4)在含或不含TLRs配体的诱导体系中，定向诱导人脐带间充质干细胞向脂肪细胞、成骨细胞分化，用油红O染色、Von Kossa染色、茜素红染色观测脂滴形成、钙盐沉积情况，并用RT-PCR方法检测分化标志蛋白(LPL，CEBPD，BMP-2，OC)的表达情况，以观察TLRs的激活对人脐带间充质干细胞多向分化潜能的影响。
(5)体外建立人脐带间充质干细胞和人外周血单个核细胞的共培养体系，利用Brdu掺入实验检测人外周血单个核细胞的增殖情况，并且用酶联免疫吸附试验试剂盒检测其IFN-γ(interfem-γ)的分泌水平，从而反映人脐带间充质干细胞对活化后的单个核细胞的免疫抑制作用以及TLRs配体的刺激对于这一作用的影响。
(6)应用ELISA试剂盒检测人脐带间充质干细胞与单个核细胞共培养上清中前列腺素E2(prostaglandin E2，PGE2)的含量，比较TLRs配体刺激组与非刺激组之间的差异；Real-time PCR方法检测脐带间充质干细胞中吲哚胺2,3-双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase，IDO)，IFN-β(interfern-β)的mRNA水平的表达情况，Western Blot法检测TLRs配体刺激后脐带间充质干细胞中转录因子IRF-3的活化情况，以探讨TLRs的激活对脐带间充质干细胞免疫抑制作用的影响中可能存在的机制。
结果：
(1)人脐带间充质干细胞中表达有TLRs，主要是TLR2，TLR3，TLR4和TLR9这五种亚型。
(2)采用TLRs各亚型相应的配体刺激脐带间充质干细胞后，可活化NF-kB信号途径，从而诱导细胞因子mRNA水平的表达。
(3)TLR3配体的刺激可剂量依赖性地抑制脐带间充质干细胞的增殖。
(4)在含有TLR3配体的诱导条件下，脐带间充质干细胞向脂肪细胞分化的能力明显增强，成脂分化标志物的表达明显升高；而TLR4配体的刺激则减弱其成脂分化能力。
(5)TLR3配体和TLR9配体的刺激能够增强人脐带间充质干细胞的免疫抑制作用，并能诱导IDO的表达，活化IRF-3信号途径，但对脐带间充质干细胞分泌PGE2的水平无明显影响。
结论：
人脐带间充质干细胞表达有功能性的TLR2，TLR3，TLR4和TLR9;TLRs的激活可影响脐带间充质干细胞的增殖，分化和免疫抑制能力，尤其是TLR3信号途径的活化。