目的通过研究B、C基因型乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein, HBx)及其变异体的功能差别,初步探讨导致B、C基因型乙型肝炎病毒相关性肝病/癌的不同临床及病理表现的机制。方法自GenBank中查找B、C基因型乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)株序列,选取其X基因片断并翻译成氨基酸序列后进行同源性比较,确定B、C基因型HBx各自的保守氨基酸序列,并寻找B、C基因型HBx的型特异性氨基酸差别。在此基础上构建保守的B、C基因型HBV X基因真核表达载体, 转染Chang细胞,研究其反式激活作用及抗细胞增殖能力的差异。自HCC患者血清中PCR扩增HBV全基因组DNA,测序并通过进化树分析对所获得的HBV DNA进行基因分型,并通过氨基酸同源比较观察HCC来源的B、C基因型HBx的变异情况,在此基础上,分别以保守的B、C基因型HBV X基因真核表达载体为模板构建相应的X基因突变体,转染Chang细胞,研究氨基酸变异对B、C基因型HBx反式激活作用及抗细胞增殖能力的影响。结果1. 对来源于GenBank的HBx的氨基酸序列进行比较,发现共有17个氨基酸具有明显的基因型特异性,分别位于第5、30、31、34、36、39、40、42、43、44、47、87、88、116、118、119、127位。其中,100%保守的B基因型特异性氨基酸位于34、39、40、42、88、119位,100%保守的C基因型特异性氨基酸位于34、39、43、47、88、118、119位。2. 构建了保守的B、C基因型HBV X基因真核表达载体,命名为BS、CS。转染Chang细胞后,发现B基因型HBx的反式激活能力强于C基因型HBx,而其抗Chang细胞增殖能力弱于C基因型HBx。3. 自HCC患者血清中PCR扩增HBV全基因DNA,克隆入pUC18载体,共获<WP=4>得22株HBV全长克隆。对22株HBV全基因进行基因分型,全为B或C基因型。氨基酸比较分析显示B、C基因型HCC患者HBx在127、130、131、132位氨基酸发生共有突变,并表现为V/I127T、F132Y、K130M+V131I、V/I127T+K130M+V131I、K130M+V131I+F132Y五种形式。HCC来源株的各突变率均高于GenBank来源株。4. 分别构建了B、C基因型HBx 127、130、131、132位点氨基酸单个和组合突变的X基因真核表达载体,突变形式分别为V/I127T、F132Y、K130M+V131I、V/I127T+K130M+V131I、K130M+V131I+F132Y,根据B、C基因型及突变后的氨基酸名称分别命名为:BT、BY、BMI、BTMI、BMIY、CT、CY、CMI、CTMI、CMIY。转染Chang细胞后,结果显示:对于反式激活能力,B基因型中BT较BS增强, BY、BMI、BMIY较BS减弱,而BTMI 与BS无差别,C基因型中CT较CS增强,其它突变体(CY、CMI、CTMI、CMIY)与CS无差别;对于抗Chang细胞增殖能力,B基因型中BT、BTMI较BS增强,BY、BMI、BMIY较BS减弱,C基因型中CY、CMI较CS减弱,CT、CTMI与CS无差别, CMIY抗Chang细胞增殖能力明显增强。结 论保守的B、C基因型HBx反式激活能力及抗细胞增殖能力不同,这与它们17个型特异性的氨基酸差异有关。HCC来源的HBx存在着氨基酸变异且各变异率均高于GenBank来源株。HBx的氨基酸变异对HBx的功能存在着影响,但不同变异对同一个基因型(B或C基因型)HBx的功能影响不尽相同,同一种变异对不同基因型(B和C基因型)HBx的功能影响趋势也不尽相同。