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本课题进行了以下工作：1.GST-Mpl-EC融合蛋白原核表达质粒的构建。PCR法扩增Mpl-ECcDNA，将其构建到已经连有GST标记的原核表达载体pET-28b质粒中，与GST基因构成融合基因，并保持靶基因的阅读框不变。PCR及酶切鉴定正确，而且DNA测序结果表明，重组质粒中多肽cDNA碱基序列和阅读框均正确，重组质粒成功。2.GST-Mpl-EC融合蛋白的原核表达。将重组质粒pET28b-GST-Mpl-EC转化入大肠杆菌BL-21中，在室温下IPTG诱导4h，SDS-PAGE检测蛋白表达，发现有可溶的GST-Mpl-EC融合蛋白表达，分子量约为90kDa，再依此条件大量诱导表达，并将可溶蛋白用谷胱甘肽-琼脂糖树脂进行免疫亲和纯化，得到可溶的纯度较高的GST-Mpl-EC融合蛋白。3.XP1及其缺失突变体原核表达质粒的构建和表达利用PCR和DNA重组技术，对XP1进行了N-端、C-端和中央区的缺失突变，并连同全长的XP1，分别构建到原核表达载体pET-28b质粒中，在大肠杆菌中表达。4.Mpl-EC及其缺失突变体原核表达质粒的构建和表达将Mpl-EC的两个亚单元分别克隆出来，通过DNA重组技术，分别构建到重组原核表达载体pET28b-GST质粒中，并在大肠杆菌中表达。5.用GSTPull-down体外实验鉴定XP1和Mpl-EC蛋白间的相互作用将GST-Mpl-EC融合蛋白固化在谷胱甘肽亲和树脂上，充当诱饵蛋白，再用重组XP1或人类巨噬细胞裂解液过柱，通过蛋白间相互作用捕获蛋白，洗脱后用SDS-PAGE和Westernblot鉴定，证实XP1和Mpl之间存在特异的相互作用。