目的：分离培养人原代骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells, hMSC)并通过多能性和表型进行鉴定，应用分子生物学方法证明hMSC有无功能性表达OCT4。　　 方法：利用Ficoll液分离出骨髓单个核细胞，贴壁培养72h后换液，去除未贴壁细胞，继续培养至细胞融合达80％时应用于实验。取第3代hMSC进行成脂、成骨分化诱导，然后相应的给予油红O染色和碱性磷酸酶染色，同时用流式(flow cytometry, FCM)分析细胞表型，以对hMSC进行鉴定。提取hMSC第1、3、5代细胞总RNA和总蛋白，以人胚胎干细胞(human embryonic stem cells, hESCs)H9为阳性对照，分别经逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)和蛋白质印迹(western blot, WB)检测细胞OCT4的表达情况。　　 结果：成功分离培养出原代hMSC;成脂、成骨诱导分化及相应的组织化学染色细胞内分别可见脂肪滴和蓝色颗粒状物质；流式分析细胞表面标记物：均一表达CD44、CD73，阳性率均达95％以上，而不表达造血细胞和内皮细胞标志CD14、CD34、CD45、CD31： RT-PCR表明细胞在mRNA水平上表达OCT-4,但WB杂交证实细胞在蛋白水平上不表达OCT-4。　　 结论：成功分离扩增hMSC，扩增的细胞纯度很高，且证明其无功能性表达OCT4。