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目的:研究IGF-1对宫颈癌淋巴管生成的的调控,观察姜黄素(Curcumin,Cur)的干预效应。
方法:1. 运用实时荧光定量PCR检测IGF-1 不同浓度、作用时间以及姜黄素干预下宫颈癌SiHa细胞中VEGF-C mRNA的表达。2. 建立宫颈癌淋巴转移鸡胚绒毛尿囊膜(chick chorioallantoic membrane,CAM)模型,运用姜黄素干预,观察移植瘤形成情况。应用D2-40和VEGF-C 抗体免疫组织化学染色(SP法)标记淋巴管,观测肿瘤微淋巴管生成情况,统计微淋巴管密度(lymphatic microvessel density,LMVD)及其面积百分比(lymphatic vessel area,LVA)进行分析。
结果:1.①宫颈癌SiHa细胞VEGF-C mRNA的表达随IGF-1 浓度的递增而变化,10ng/ml时达峰值。0.5ng/ml、1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、50ng/ml组表达量依次为对照组的1.34、1.67、3.14、5.28和3.02倍。②VEGF-C mRNA表达随IGF-1 不同作用时点而变化,6h 达峰值。2h组、4h组、6h组和8h组的表达量分别为对照组的1.30、2.51、5.33和2.83倍。③分别加入IGF-1(10ng/ml)、Cur(10μm/ml)和Cur(20μm/ml)时,VEGF-C mRNA的表达量依次为对照组的5.51、0.72和0.21倍。④分别加入IGF-1(10ng/ml)、IGF-1+Cur(10μm/ml)和IGF-1+Cur(20μm/ml)时,VEGF-CmRNA表达量依次为对照组的5.51、1.42和0.67倍。
2. ①成功建立宫颈癌淋巴转移CAM模型,最适细胞接种浓度为107/L,成瘤率达75%,接种后第5日达生长高峰。②移植瘤组织切片HE染色可见癌细胞聚集成癌巢。免疫组化染色,可见移植瘤内有微淋巴管形成。③对照组、IGF-1组、Cur组和IGF-1+Cur组的LMVD依次为21.28±10.13、28.58±12.26、16.23±8.76和18.23±9.36条/4HP,LVA依次为2.91±1.16、3.42±1.25、2.00±1.51和2.72±1.21%,差异具有统计学意义(P<0.05)。
结论:IGF-1能够上调宫颈癌VEGF-C的表达,促进淋巴管生成。姜黄素能有效抑制IGF-1 诱导的VEGF-C的表达,抑制淋巴管生成。