乳铁蛋白（Lactoferrin,LF）也叫做乳转铁蛋白,具有维持生物体铁稳态的作用。LF在动物的初乳中含量最高,在常乳中相对较低。LF在生物体的各种生理活动中都具有极为关键的作用。LF可以利用自身特殊的分子结构来吸附Fe³⁺,从而抑制细菌细胞膜的形成,达到抑菌效果。同时,在炎症反应中,LF可以通过抑制促炎因子的分泌和提高抗炎因子的水平,发挥抗炎作用。miRNA是一种长度小于25nt的具有调控基因表达作用的非编码RNA,其在生物体的作用广泛且重要,其主要作用是调控基因的转录后翻译。本试验分析了LF基因序列,构建了LF原核表达载体,成功获取了针对奶山羊LF蛋白的多克隆抗体,构建了pc DNA3.1-LF超表达载体,预测并验证了在乳腺上皮细胞内miR-214能够调控LF的表达,研究了在细胞内miR-214通过靶向LF对炎症相关因子表达的影响。获得的主要研究成果如下:克隆得到LF的序列片段,成功构建了LF的原核表达载体,并将该载体进行原核表达,检测到最适的表达条件为:37℃、4h、0.05 mmol/L IPTG。纯化蛋白浓度达到2.2mg/m L。制备的多克隆抗体效价检测为1:10⁷,且特异性良好。通过在线网站预测到miR-214与LF m RNA存在互补配对位点。同时构建psi-check2-LF双荧光载体。结果显示,与miR-214 mimic control相比miR-214 mimic可以显著抑制双荧光素,确定了miR-214与LF之间的靶标关系。通过QRT-PCR检测miR-214与LF m RNA水平,发现与对照相比,miR-214 mimic转染后miR-214水平上升超过300倍,确定了miR-214 mimic的转染效率,同时与mimic control组相比,miR-214 mimic转染后细胞内LF m RNA水平显著下降（P<0.01）。Western blot结果表明,转染miR-214 mimic后,乳腺上皮细胞内LF蛋白的含量显著降低（P<0.05）;对乳腺上皮细胞内的LF表达具有调控作用。构建pc DNA3.1-LF超表达载体,利用LPS（1μg/m L）构建炎症模型,发现在LPS处理后,细胞内的促炎因子IL-6和IL-8的含量显著升高（P<0.01）,而抗炎因子IL-10的含量显著下降（P<0.01）。在转染pc DNA3.1-LF超表达载体后,与对照相比,细胞内的IL-10的含量显著上升（P<0.01）,而IL-6和IL-8的含量显著下降（P<0.05）。在转染miR-214 mimic后,以上变化趋势都受到相反调控。说明LF在细胞内具有重要的免疫作用,而miR-214可以通过影响LF基因的表达从而影响其免疫调控。综上所述,本试验成功构建出截短型LF原核表达载体并成功表达,制备了针对奶山羊LF蛋白的多克隆抗体。同时发现在山羊乳腺上皮细胞内,miR-214可以通过靶向LF影响炎症因子的表达。研究结果为非编码RNA对LF表达调控的研究提供理论基础,为探究miR-214与炎症反应间的关系积累实验依据。