表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)是ErbB家族成员之一,具有酪氨酸激酶活性,是一种重要的跨膜受体。该家族成员还包括HER2/erbB2,HER3/ erbB3,HER4/erbB4。表皮生长因子受体由胞外段,跨膜区和胞内激酶活性区构成。其胞外区的主要功能是结合表皮生长因子EGF等配体激活受体胞内段酪氨酸激酶活性,启动信号传导通路,在正常组织及肿瘤组织中起到调节细胞增殖、分化的作用。EGFR在肿瘤进展过程中发挥了重要的作用,它能够促进肿瘤细胞的增殖、迁移、抑制凋亡以及促进肿瘤组织的血管生成等[1,2]。临床研究显示,肿瘤的恶化、患者的低生存率以及对药物的低敏感性与肿瘤细胞胞表达EGFR分子成正相关[3]。近年来,随着癌症检测手段的发展,在很多癌症包括前列腺癌、肺癌、胃癌、结肠癌、卵巢癌等患者中检测到了EGFR的异常高水平的表达[1,2,4]。因此,EGFR成为肿瘤靶向研究的热点。两个研究比较成功的例子是单克隆抗体和小分子酪氨酸抑制剂(TKI)。其中单克隆抗体方面的Cetuximab、panitumumab, TKI方面的Tarceva(Erlotinib)、Iressa(Gefitinib)等已经被FDA批准用于临床的癌症治疗。这两方面的成功提示我们,靶向EGFR的治疗策略是可行的,并将在癌症治疗领域发挥巨大作用。在本研究中,我们试图通过对小鼠免疫异种EGFR蛋白,使小鼠产生抗EGFR的抗体,来阻断EGFR信号通路,从而达到抗肿瘤效果。根据GenBank发表的鸡源EGFR基因序列,我们设计了一对特异性核苷酸引物,用PCR方法获得鸡源EGFR胞外部分642bp大小的基因片段,并将其克隆到表达载体pGEX-4T-2上,测序鉴定正确后,转化到表达菌株BL21(DE3)中,经PCR鉴定和酶切鉴定筛选出阳性克隆,IPTG诱导,并进一步通过Ni-NTA Agarose亲合层析纯化目的蛋白,纯化产物以SDS-PAGE鉴定。纯化产物经透析复性,Western blot鉴定其抗原性,得到用于免疫的GST-cEGFR融合蛋白。将14只C57BL16J小鼠随机分为2组,GST-cEGFR实验组7只、生理盐水对照组(NS)7只,实验组和对照小鼠每只分别于第0,2,3周注射100μgGST-cEGFR融合蛋白和100μL生理盐水。接种Lewis肺癌细胞,观察肿瘤的生长情况和小鼠状态并检测小鼠血清中特异性抗EGFR抗体滴度。实验中成功克隆了包含642bp的鸡源EGFR基因,构建了原核表达重组质粒pGEX4T2-cEGFR。cEGFR-GST融合蛋白在大肠杆菌中得到了高效表达,经Ni-NTA Agarose纯化后得到纯度达85%以上的重组融合蛋白。经复性,融合蛋白以可溶的形式存在,Western blot鉴定该融合蛋白具有抗原性。动物实验结果表明,GST-cEGFR疫苗组小鼠血清的抗EGFR抗体滴度为1∶5000,并对小鼠肿瘤生长有一定的抑制效应。本研究表明,通过基因工程方法制备出的异种重组EGFR蛋白,可在小鼠体内诱导出抗EGFR抗体,成功的打破了小鼠的免疫耐受,有一定的抗肿瘤效应。这种异种蛋白疫苗策略在肿瘤主动免疫治疗领域将会有良好的发展前景。本研究表明,通过基因工程方法制备出的异种重组EGFR蛋白,可在小鼠体内诱导出抗EGFR抗体,成功的打破了小鼠的免疫耐受,有一定的抗肿瘤效应。这种异种蛋白疫苗策略,是一种有效的特异性主动免疫方法,在肿瘤主动免疫治疗领域将会有良好的发展前景。