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针对近年来广东省连州市茄子(Solanum melongena L.)上发生的一种由拟茎点霉属[Phomopsis(Saac.)Bubak]真菌引起的新病害的严重危害情况,在调查这种新病害发生特点和危害情况的基础上,应用传统的真菌形态学鉴定方法,结合病原菌的rDNAITS序列分析技术,对引起该病害的病原菌拟茎点霉进行形态学及分子特征鉴定,并研究了该病原菌及其近似种的系统发育关系。在生物学特性方面,对该病原菌与茄子上的另一个拟茎点霉真菌即茄子褐纹病菌(p.vexans)进行了初步的比较分析,为该病害的防治提供了重要理论依据。研究结果如下:
初步查明:这种新的拟茎点霉病害只为害茄子茎干,发病率一般为15%~20%,严重的高达40%,疏于管理的田块发病重。该病发病后在茄子茎干上逐渐形成明显隆起(肿胀)的干腐病斑,病斑灰白色,无明显轮纹,中后期病斑表面可见小黑点,稍微稀疏,病斑通常可相连成大块状,严重影响植株正常生长,引起植株早衰,导致新叶、果实生长缓慢,其发病特点与茄子上的另一个由拟茎点霉引起的茄子褐纹病有明显不同,茄子褐纹病除可为害茄子的茎干引起稍凹陷的病斑以外,还可为害叶片及果实,引起叶斑、茎枯、果腐,通常病斑有明显轮纹,上面密生小黑点。因此,本研究将这种新病害定名为茄子肿腐病。
目前,拟茎点霉属真菌鉴定仍以形态学鉴定为主,通常属级分类以病原菌形态特征为基础,主要根据分生孢子形态以及载孢体特征。通过病原菌的分离和镜检,确定茄子肿腐病的病原菌在形态学上具有典型的拟茎点霉属真菌的特点,载孢体真子座质,球形、扁球形、三角形或不规则形,单腔;分生孢子梗无色,分隔,二叉状分枝,10.0~18.0μm×1.5~2.0μm;甲型分生孢子单胞,纺锤形,顶端尖,基部钝圆,含两个油球,6.0~8.0μm×2.0~2.5μm;在燕麦培养基(OMA)(25℃)上乙型分生孢子线形,稍弯或顶端呈钩状,16.0~28.0μm×0.7~1.0μm。该病原菌与褐纹病菌(p.vexans)虽然可寄生在茄子同一部位,但在形态上有较大差别,茄子肿腐病菌的甲型分生孢子较茄子褐纹病菌(p.vexans)的5.2~8.0μm×1.8~2.2μm要大,乙型孢子也较茄子褐纹病菌(p.vexans)的12.5~28.0μm×0.6~1.0μm要长。
病原菌rDNA ITS序列分析表明,茄子肿腐病菌菌株与GenBank中相似性较高的10个拟茎点霉(Phomopsis sp.,其有性态名称为Diaporthe spp.)菌株亲缘关系均较远,在生成的系统发育树中,并不能与任一个拟茎点霉菌株直接聚在同一个分支上。其中与p.longicolla的两个菌株的亲缘关系最近,同源率也只达到96.2%,绝对遗传距离相差21个碱基。而与同样寄生在茄子茎干上的褐纹病菌(p.vexans)菌株的ITS序列同源率仅为95.0%,绝对遗传距离则达到29个碱基差异,这与它们在形态上的差异表现是一致的。通过以上形态学鉴定和分子水平的分析比较可知,茄子肿腐病菌与茄子褐纹病菌有很大的差别,是两个不同的种,故将其鉴定为拟茎点霉属的一个新种,定名为茄拟茎点霉(Phomopsis solani H.Huang et E.Zhou,n. sp.)。
在生物学特性方面,茄子肿腐病菌在马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)上菌丝灰白色,放射状生长,菌落边缘整齐,中部有产生黄色分泌物。在燕麦琼脂培养基(OMA)上菌丝灰白色,絮状,后期变为淡黄色丝缕,7~10 d后(25℃,光照)开始形成少量黑色载孢体。培养性状与茄子褐纹病菌(p.vexans)的较为一致,但肿腐拟茎点霉(p.solani H.Huang et E.Zhou,n.sp.)在OMA上灰白色,颜色较褐纹拟茎点霉(p.vexans)暗色,亦较早能形成载孢体。在与褐纹拟茎点霉(p.vexans)的比较试验中,肿腐拟茎点霉(p.solani)对不同温度、不同酸碱度条件的适应性要差,对多菌灵、咪鲜胺的毒力试验中,肿腐拟茎点霉(p.solani)亦表现出更强的敏感性。上述试验结果表明两菌在生物学方面亦存在明显差异。