目的:本研究选取茜草Rubiacordifolia L.为研究对象,通过大孔树脂对其总蒽醌(TAR)提取和纯化工艺进行研究,从而得到纯度较高的茜草总蒽醌产物;并对其总蒽醌和醇提物等物质的抗氧化和抗炎活性进行初步研究,以期找到起抗氧化和抗炎作用的主要成分,为将来的应用开发打下基础。方法:1.建立分光光度计法测定茜草总蒽醌的含量的方法;并通过控制变量法优化茜草总蒽醌的提取工艺增加其产率;另外分别使用静态、动态吸附和解离的方法选择出性能最佳的大孔树脂型号,并优化大孔树脂的纯化总蒽醌工艺。2.通过利用FRAP、DPPH、ABTS等化学检测法测定不同批次的茜草药材的消除自由基能力和总抗氧化能力,从而判断出不同批次药材之间抗氧化活性的差异。建立茜草低极性物质的指纹图谱,并使用PLS、OPLS等统计学关联方法与指纹图谱进行关联,寻找与抗氧化活性相关的潜在物质。3.MTT法检测经纯化的茜草总蒽醌以及不同化学部位提取物和羟基茜草素对巨噬细胞RAW264.7炎症模型的细胞毒性。分别给予不同浓度的茜草总蒽醌提取物以及不同化学部位提取物和羟基茜草素巨噬细胞RAW264.7,同时加入LPS使其终浓度为0.1μg/mL,共同作用18小时后,分别检测细胞培养上清液NO、IL-1β、IL-6、IL-10以及TNF-α的浓度。4.茜草醇浸出物作用于佐剂性关节炎小鼠,分为六组(空白组、模型组、阳性对照组、低、中、高浓度给药组)。每3天记录体表特征指数(体重、右踝关节直径和肿胀度评分),并于第21天处死所有小鼠,收集血清,取肝脏作10%肝脏匀浆,并作肾脏、肝脏、脾脏等主要器官的HE染色石蜡切片。ELISA法测定血清中IL-1β、IL-6、IL-10以及TNF-α、IFN-γ,另外测定10%肝脏匀浆中SOD、MDA等测定抗氧化能力和谷胱甘肽等指标。结果:1.建立了一个稳定、可靠的测定茜草内总蒽醌含量的测定方法。方法学考察表明,该方法精密度RSD为0.21%,稳定性RSD为0.20%,重复性RSD为1.83%,加样回收率平均值为105.3%,准确度RSD为1.57%,均符合规定。并通过优化了各种提取参数确定了 TAR的提取方式。筛选出D101型大孔树脂,并使用D101型大孔树脂进行纯化,可以增加TAR的产率,其最佳工艺为:取经预处理的D101型湿树脂10mL,湿法装柱,取上柱液40mL,另加水60mL,湿法拌样。使D101型树脂充分吸收药液。不间断摇匀。放置12小时。待吸附12小时后,湿法装柱。收集液体,以便计算柱体积。再用6BV的纯水进行洗脱。纯水洗脱后,使用15BV的75%乙醇进行洗脱,收集75%乙醇洗脱液。即得TAR。2.抗氧化研究结果表明消除自由基能力最好的批次依次为QC-14、QC-1、QC-3,最差的为QC-6;由ABTS结果可知,消除自由基能力最好的批次依次为QC-14、QC-1、QC-2,最差的为QC-13;由FRAP结果可知,消除自由基能力最好的批次依次为QC-14、QC-1、QC-3,最差的为 QC-13。3.建立了一个稳定的可靠的茜草低极性物质的指纹图谱。并使用PLS、OPLS关联得出峰3、峰5、峰6、峰7、峰9、峰12、峰13、峰15这七个峰都是潜在的具有抗氧化活性的物质,其中第5个峰为羟基茜草素、第13个峰为大叶茜草素。4.从ELISA测定细胞上清液的结果可知,与空白组比较,模型组的IL-1β、IL-6、TNF-α浓度都有显著性的提高(p<0.001)。与模型组比较,EER和EAER、CFR降低IL-1 β、IL-6、TNF-α,并且都呈一定的剂量依赖性。其中EER可以显著性的降低IL-1β、TNF-α的浓度(p<0.05)。CFR的高、中浓度组以及EAER的高浓度组可以显著性的降低IL-1 β、IL-6、TNF-α的浓度(p<0.05)。而CFR的低浓度组和EAER低、中浓度组与模型组对比则无明显药效。与空白组比较,模型组的IL-10则有提高的趋势。而与模型组作比较,EER的中、高浓度组都有显著性提高IL-10的浓度(p<0.05)。5.与空白组比较,模型组的IL-1 β、IL-6、TNF-α浓度都有显著性的提高(p<0.05)。与模型组作对比,EER、TAR和Purpurin都可以显著性的降低IL-1 β、IL-6、TNF-α浓度(p<0.05)。其中TAR和Purpurin的高、中浓度组的药效优于阳性对照组和EER组。与空白组比较,模型组的IL-10浓度都有显著性的提高(p<0.01)。与模型组比较,EER、TAR和Purpurin的中、高浓度组都可以明显的提高IL-10的浓度。6.茜草醇浸出物作用于佐剂性关节炎小鼠结果表明,六个组别的小鼠的体重都有随着时间的推移而增加的趋势,右踝关节直径都有随着时间的推移先升高后降低的趋势,而足趾肿胀度评分都有随着时间的推移先升高后降低的趋势。三组给药组(低浓度组、中浓度组、高浓度组)的效果与阳性对照组相近。肝、肾组织形态与空白组比较没有明显的病理改变。模型组小鼠的踝关节切片周围关节腔可见明显的炎性细胞浸润,部分炎性细胞浸润至关节腔隙。与模型组比较,阳性对照组和茜草给药组的关节腔都更趋向与正常组。7.肝脏匀浆中SOD、NO、GSH-Px三者有显著性的提高(p<0.01)。POD、超氧阴离子自由基、MDA三者都随着茜草醇浸出物的浓度增大而降低,与模型组比较,低、中、高浓度组都对POD有显著性的提高(p<0.01),超氧阴离子自由基、MDA显著性的降低(p<0.01)。与模型组对比,低、中浓度组显著性的降低了过氧化氢、对总抗氧化能力以及微量还原性谷胱甘肽(p<0.05,p<0.01),低、中浓度组显著性的提高了 T-GSH、T-GSH-2GSSG、GSSG 的浓度(p<0.05,p<0.01)。结论:从以上实验结果可知,D101型大孔树脂适合进行茜草总蒽醌物质的纯化工艺;茜草醇提物中含有一定的抗氧化活性的物质,其中包括了大叶茜草素和羟基茜草素;茜草总蒽醌以及不同化学部位提取物和羟基茜草素对巨噬细胞RAW264.7的细胞炎症模型作用表明,其总蒽醌物质可能是其主要抗炎物质;而且茜草醇浸出物高、中剂量对佐剂性关节炎小鼠均有较好的治疗效果。