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目的:建立快速、专属、准确、灵敏度高的定量分析石杉碱甲的LC-MS/MS方法;观察注射用石杉碱甲缓释微球的血药浓度经时变化过程,计算人体药代动力学参数,评价石杉碱甲缓释微球在健康人体的药代动力学特征及缓释效果;探索石杉碱甲的代谢途径,寻找可能的代谢产物,为石杉碱甲新药研发和临床使用后毒副作用的分析提供理论基础。研究方法:本研究采用液液萃取的方法将石杉碱甲从血浆中提取出来,进入LC-MS/MS系统进行定量分析。以10 m M醋酸铵溶液为水相,甲醇为有机相,经Ascentis-C18柱(10 cm×2.1 mm,5mm)梯度洗脱将待测物石杉碱甲分离后,进入质谱检测系统。选用电喷雾离子化源(ESI),多重反应检测(MRM)的正离子检测模式,定量分析的线性范围是10-3000 pg/m L,用于定量分析的离子对为m/z 243.1?m/z 210.1(石杉碱甲)和m/z 285.2?m/z 193.1(内标地西泮)。试验以健康成年志愿者为对象,采用随机、双盲、安慰剂对照的试验设计,单次给予志愿者肌肉注射0.75 mg、1.5 mg、3.0 mg、4.5 mg和6.0 mg五个剂量的石杉碱甲,用以上所述LC-MS/MS定量方法对各时间点人血浆中石杉碱甲的浓度进行测定,用DAS 3.0软件计算药代动力学参数,根据数据评价其药代动力学特征;收集受试者服用石杉碱甲后的尿液样本,经Oasis HLB固相萃取柱处理后进行质谱分析,结合石杉碱甲的结构和采集得到的色谱、一级质谱、二级质谱数据,推测其在人体内可能发生的代谢反应。结果:本研究建立的人血浆样本中石杉碱甲的LC-MS/MS定量分析方法专属性强、准确度好、灵敏度高,适用于注射用石杉碱甲缓释微球的人体药代动力学研究。达到了很高的灵敏度(LLOQ为10 pg/m L),样品的分析时间为8.5 min,准确度在85.33%到112.33%之间,日内精密度小于9.73%,日间精密度小于9.63%,提取回收率高,基质效应对石杉碱甲和内标地西泮的测定无影响。稳定性研究结果表明:石杉碱甲血浆样品-80°C冰冻放置360天、-80°C反复冻融三次、样品处理前室温放置4 h及提取后进样小瓶中放置4 h均稳定。本研究发现石杉碱甲缓释微球在人体内的AUC0-t、AUC0-∞及Cmax与给药剂量呈线性相关,消除速率常数与剂量没有依赖关系,在0.75 mg~6.0 mg给药剂量范围内,石杉碱甲具有线性药代动力学特征。其达峰时间和半衰期明显延长,实现了缓释的目的。结合石杉碱甲代谢实验所采集的数据,推测其可能发生了去饱和、氧化、脱氨基同时去饱和的三种反应。