凋亡蛋白的克隆表达与性质研究

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细胞凋亡(apoptosis),又称细胞程序死亡(programmed cell death,PCD),是机体主动程序化地导致细胞死亡的过程。1979年在日本发现的鸡贫血病毒(chicken anemia virus,CAV)的VP3基因表达的凋亡蛋白(apoptin)能够选择性地诱导肿瘤细胞或转化细胞凋亡,对正常细胞无影响。如果能够将凋亡蛋白通过基因工程或基因治疗的方法运用到抗肿瘤治疗方面,具有重要的理论和实践意义。 由于凋亡蛋白不能直接进入细胞,因此通过基因工程的方法将VP3基因连接了不同蛋白转导域(PTD,protein transduction domain)后克隆到原核表达载体pET28b和pET43.1上,转入大肠杆菌E.coli BL21(DE3)后,表达得到重组蛋白。本研究工作选择了两种蛋白转导域,一种是研究较多的来自于人免疫缺陷病毒(HIV)的转录活化因子(trans-activating transcriptional activator,Tat),另一种是基于多数穿膜肽都富含精氨酸的理论基础上设计的一系列串连精氨酸(poly-arginine)。 重组表达得到的连有两种不同穿膜肽的凋亡蛋白分别在天然状态和变性状态下通过NI-NTA纯化后得到电泳纯,纯品经过透析、过滤后进行肿瘤细胞凋亡实验。MTT法测定细胞存活率表明,纯化得到的凋亡蛋白对Hela细胞具有抑制作用。
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