杭州西溪湿地土壤细菌多样性及高效脱氮菌的筛选

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从西溪湿地采集5个土壤样品,利用MiSeq高通量测序技术,对样品的细菌群落结构和多样性进行了研究。结果显示,西溪湿地土壤样品具有很高的细菌多样性,涵盖了28个门346个属。变形菌门(Proteobacteria)是各样品的优势菌群,丰度高达23.16%-39.19%。其中,α-变形菌纲(Alphaproteobacteria)、β-变形茵纲(Betaproteobacteria)和δ-变形菌纲(Deltaproteobacteria)占主导地位。通过比较5个土壤样品细菌群落间的相似性,发现NT和TJ样品相似性较高,在系统发育树中聚为同一分支。  采用纯培养的方法,从土壤样品中分离得到一株高效异养硝化细菌TT1。通过形态观察、生理生化反应以及16S rRNA基因序列分析,鉴定该菌株属于假单胞菌属(Pseudomonas)。硝化特性研究结果表明,TT1菌株在28h左右进入生长稳定期,碳源、C/N、温度等因素均对氨氮去除有较大的影响,在乙酸钠为碳源、C/N11、转速140r/min、pH7-9及温度35℃时脱氮效果最佳,培养24h后的NH4+-N去除率为100%。  通过BTB选择培养基平板分离的方法,分离到一株高效好氧反硝化细菌CD1。显微镜观察显示,菌株呈杆状,革兰氏染色阴性,没有芽孢。16S rRNA基因测序结果显示,菌株CD1与变形假单胞菌(Pseudomonas plecoglossicida)亲缘关系最近,但同源性仅为92.9%。脱氮特性研究结果表明,CD1菌株在22h左右进入生长稳定期;好氧反硝化最佳条件是柠檬酸三钠为碳源,C/N15,温度35℃,pH7-8,摇床转速160r/min,培养24h后的NO3--N和NO2--N去除率为100%。
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