视网膜血供特点十分特殊，易致缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury,IRI)。视网膜中央血管阻塞、青光眼及机械性眼外伤等均与视网膜IRI密切相关。研究发现，自由基形成、钙超载、兴奋性氨基酸释放和白细胞浸润等均参与组织损伤，但视网膜IRI的早期始动因素至今尚不明了。研究表明，核因子-κB(nuclear factor-kappaB，NF-κB)通过调节一系列基因的转录和表达而在心肌、脑、肝等部位再灌注损伤中起十分重要的启动作用，但在视网膜IRI中的作用尚未明确。单唾液酸四己糖神经节苷脂(monosialoganglioside，GM-1)为一种神经保护剂，可阻断兴奋性氨基酸与自由基毒性、减轻水肿和钙超载、增加神经营养因子的功能，从多方面促进神经细胞存活，已在实验和临床研究中证实对多种神经系统疾病和IRI有良好保护效果，但国内未见GM-1在眼部的相关研究。本实验拟通过视网膜形态学观察和测量以及免疫组织化学SP法，探讨大鼠视网膜IRI中NF-κB的活化情况和GM-1郑州人十2002十研究生毕业沦文 视＊膜缺m山灌注拟伤＊卜h活化和＊＊1保护作用的实验研究的保护作用，为视网膜皿的发病机制和临床治疗提供新的思路。 本实验选用健康无眼病的成年 Wstar大鼠 125只，随机分为4组：正常对照组、单纯缺血再灌注损伤组＊ 组卜IRI＋生理盐水处理组州S组和 IRI＋GM刁治疗组（GM刁组卜除正常对照组＊只冲，另三组通过升高眼压造成双眼视网膜完全缺血60分钟，并分别于再灌注oh（单纯缺血）、lh、3h、6h、12h、24h、3d和 7d共 8个时间点进行观察分析，每时间点 5只。IRI组仅制作缺血再灌注模型，NS组和 GMl组分别于缺血前 12h＊h及缺血结束后3次腹腔注射NS 3m／kg或GM13mlilig相当于30m叭g） 于相应的时间点摘除眼球，常规制备切片，HE染色，光学显微镜下观察视网膜形态学改变，目镜测微尺测量内层视网膜平均厚度的变化；透射电镜观察正常组JM组再灌注 oh、6h、24h、7d以及 GMl组再灌注 6h。24h、7d时细胞损伤或凋亡的超微结构改变，免疫组织化学SP法观察NF－KB的活化惰况，探讨缺血再灌注后及GM1应用后各指标的变化和相互关系。 结果 1．光学显微镜下观察：厂）IRI组和 NS组改变相似，缺血60分钟，再灌注 0一门，内层视网膜明显水肿胞浆内有大量空泡；再灌注24h可见较多固缩的胞核；再灌注3—7d，内层视网膜萎缩，细胞数减少八2NM刁组缺血再灌注后组织水肿和萎缩的程度较IRI组和 NS组减轻，对视网膜具有保护作用。各组均未见外层视网膜异常。 2．内层视网膜平均厚度：门）正常组为 OS．25士 3．82户 m。IRI 2为叫v人‘zM02年研九牛毕业论父 观H昭缺血再灌们洲J＊卜炽恬化和＊M1饼护h叫5的”么验研人组和 NS组变化相似（P＞0刀5）：缺血 60分钟，内层视网膜开始增厚（P＜0刀5）；再灌注1—12h明显增厚（P＜0．of），6h达高峰；再灌注24h，恢复到正常组水平（P＞0．05）；再灌注3d与正常组相比明显变薄仰0．01X 7d时进一步变薄（P＜．of卜p）GMq组，缺血后，内层视网膜也开始增厚卜0刀5）；再灌注 l—12h显著增厚po0．of），再灌注 0—3h，内层视网膜厚度与 IAI组和 NS组相比差异均无显著性（P＞0．05），但再灌注 6—12h则较以上两组明显下降卜0刀1）：再灌注24h及3d，内层视网膜厚度均处于正常水平仲0刀5）；再灌注7d，视网膜较对照组明显变薄仰0刀 1），但明显厚于 IRI组和 NS组po0刀 1、 3．透射电镜观察：门厂RI组，单纯缺血后，视网膜内层仅见线粒体轻度扩张；再灌注6h，线粒体显著肿胀、内质网扩张，神经纤维肿胀，突触小泡消夫；再灌注24h，内核层内大量细胞核染色质浓缩、边集，核扭曲、碎裂，呈现凋亡特征；再灌注7d，内层视网膜萎缩变薄，细胞明显减少，超微结构紊乱。mGM刁组线粒体肿胀、细胞凋亡和萎缩等超微结构变化程度较轻，进一步证实GMJ的保护作用。外层视网膜均未见明显变化。 4．NF吧的活化：门）正常组几乎无 NF－KB活化，内层视网膜 NF－。B阳性率为 0．22％士0．15％。仪厂RI组和 NS组变化相似（P＞0刀5卜缺血60分钟，有零星分布的NFJ吧阳性细胞，主要为小胶质细胞和血管周围细胞，阳性率与正常组相比差异无显著性（P＞0刀5）；再灌注lh，节细胞层、内核层内可见大量细胞核棕黄色着染，NF4B阳性率明显升高达高峰（P＜0刀 1）， 3郑州人学2002年研究牛毕业论义 讹M8rt缺血叮胸个Z伤NFed is化和GM．I保护什用的实验研究分别为四95％士3．58％和28M％士343％；随后NF－出阳性率逐渐下降，再灌注3—7d时维持于较低水平，但仍高于正常组po 0．05、（3）Gl组缺血后NF－KB阳性率为l．24％土0．34％，与 IRI组和 NS组差异无显著性（P＞0刀5）；再灌注 lh，NF人B阳鹏明溯砸＊．99％士IAf％卜0刀1）；随后逐渐下降，