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TET2蛋白(ten-eleven-translocation 2)是一种DNA甲基化修饰酶,它是在进化上高度保守的TET(ten-eleven-translocation)家族成员之一,通过将5m C氧化为5hm C而发挥作用。研究在动脉斑块发生初期,DNA甲基化谱异常,表明斑块中自噬异常。本课题组前期研究表明,高脂饮食apo E-/-小鼠动脉粥样硬化病变中自噬障碍、TET2表达水平下调,推测TET2可能通过调节自噬途径从而发挥抗动脉粥样硬化作用。为证实该假说,本研究首先采用apo E-/-小鼠动物模型结合慢病毒转染技术,观察TET2过表达对apo E-/-小鼠动脉粥样硬化病变以及自噬的影响;在此基础上,通过质粒转染的方法观察TET2对HUVECs(Human umbilical vein endothelial cells)自噬及其潜在的分子机制。目的:探索TET2对apo E-/-小鼠动脉粥样硬化病变的影响及其可能潜在分子机制。方法:8周龄的雄性apo E-/-小鼠40只,适应性喂养一周后,随机分为两组:对照组、过表达TET2组,每组20只,分别尾静脉注射生理盐水及过表达TET2慢病毒,每六周注射一次,每只小鼠慢病毒注射量为4×107TU/次,两组小鼠均高脂饮食,自由饮水,喂养12周后,将小鼠处死。全自动生化分析仪测定两组血脂水平,苏丹Ⅳ染色法及体视显微镜下观察主动脉脂质蓄积情况,HE染色法观察主动脉根部病理形态改变,油红O染色法检测主动脉窦部动脉粥样硬化病变处脂质蓄积的情况,免疫荧光法检测主动脉根部TET2和自噬标志物Beclin 1、微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)和自噬障碍标记物p62表达情况,及主动脉根部甲基化水平改变情况。培养HUVECs,质粒转染使细胞过表达或沉默TET2后,50μg/m L ox LDL处理细胞24小时,免疫荧光细胞化学方法观察细胞TET2蛋白、5hm C、5m C含量变化情况;Western blotting检测细胞中TET2蛋白、自噬标记物Beclin1、LC3、P62蛋白的表达;以m RFP-GFP-LC3腺病毒感染细胞36h,观察其自噬流变化;亚硫酸氢盐修饰后测序法检测自噬相关基因Beclin1启动子甲基化改变情况。结果:过表达TET2组的血脂水平与对照组相比无明显改变,但主动脉粥样硬化病变面积明显减少;HE结果表明与对照组相比,过表达TET2组小鼠动脉粥样硬化程度降低,油红O染色分析结果显示过表达TET2可以减少apo E-/-小鼠主动脉窦部动脉粥样硬化斑块脂质蓄积;免疫荧光及Western blot结果表明动脉粥样硬化斑块中5hm C含量及自噬标记物Beclin1、LC3Ⅱ含量明显增加,p62的表达水平降低。过表达TET2能够使细胞TET2、Beclin 1、LC3Ⅱ蛋白表达上调,5hm C含量增加,5m C含量减少,P62蛋白表达下调;而TET2低表达能够使Beclin 1、LC3Ⅱ蛋白的表达下调,P62蛋白表达上调;细胞转染m RFP-GFP-LC3腺病毒后,过表达TET2组细胞出现明显增强的自噬流;甲基化检测结果表明,过表达TET2能够降低细胞Beclin1启动子区域甲基化。结论:过表达TET2减轻高脂饮食apo E-/-小鼠动脉粥样硬化病变,其机制可能是通过上调血管内皮细胞自噬及自噬流来实现的。