论文部分内容阅读
目的：乳腺癌是全球女性最常见的癌症。乳腺癌的发生是一个有多种基因参与的复杂的过程。乳腺癌细胞中存在一类具有自我更新及分化能力的细胞亚群,这类细胞被称为乳腺癌干细胞(BCSCs)。BCSCs在乳腺癌中含量很低,但是在乳腺癌发生发展、侵袭及治疗中发挥重要作用,是乳腺癌发生药物治疗抵抗的重要原因。RBPMS1是RNA结合蛋白家族中的成员,能够调节mRNA的加工。已有研究表明RBPMS1能促进乳腺癌增殖和迁移,但其在乳腺癌干细胞中的作用尚不明确。本课题主要研究RBPMS1调节乳腺癌干细胞的分子机制,阐明RBPMS1在乳腺癌干细胞自我更新的调节及乳腺癌耐药中的作用,明确RBPMS1在乳腺癌标本中的表达及临床意义,为乳腺癌的诊断和治疗提供新的思路。方法：1对乳腺癌干细胞含量的影响：利用流式细胞术检测CD44+/CD24-/low和ALDH+细胞数；悬浮培养检测肿瘤微球体形成的数量及大小2对乳腺癌生长的调节：利用生长曲线检测对乳腺癌生长速度的影响；利用划痕实验检测对乳腺癌迁移能力的影响。3 RBPMS1调节乳腺癌干细胞及耐药的机制：western blot等技术检测RBPMS1对乳腺癌干细胞相关转录因子的调节；通过耐药实验检测RBPMS1通过Sox2调控乳腺癌细胞耐药。4临床意义：利用免疫组化检测RBPMS1在乳腺癌组织和癌旁组织中的表达,比较癌组织和癌旁组织的差异。结果：1敲低RBPMS1后流式细胞术检测CD44+/CD24-/low和ALDH+细胞数升高,升高效应可被过量表达RBPMS1蛋白的三个亚型抑制,提示RBPMS1能够调控乳腺癌干细胞。2敲低RBPMS1后乳腺癌干细胞肿瘤微球体形成的数量增多、体积增大,进一步证明RBPMS1对乳腺癌干细胞的调控。3敲低RBPMS1促进乳腺癌生长及迁移,促增殖和促迁移效应可被过量表达RBPMS1蛋白的三个亚型抑制。4敲低RBPMS1, Sox2在蛋白水平的表达升高,提示RBPMS1可能通过调控Sox2在蛋白水平的表达实现对乳腺癌干细胞的含量及自我更新的调节。5通过多西他赛耐药实验及构建的多西他赛耐药细胞系发现,RBPMS1通过调控Sox2提高乳腺癌对多西他赛的耐药。6 RBPMS1在癌旁组织中的表达高于癌组织结论：RBPMS1在乳腺癌组织中表达降低,能够调控乳腺癌干细胞的含量及乳腺癌对多西他赛的耐药,这种调节作用是通过调控Sox2蛋白水平的变化实现的。