RNAi抑制绒山羊FGF5基因表达的研究

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:skyy2483
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绒山羊所产山羊绒是天然的纤维资源,是一种高档的纺织原料,具有较高的经济价值。绒长度、毛长度和绒毛细度是绒山羊的重要经济性状,决定绒纤维的价格和绒毛品质。许多研究发现FGF5基因参与毛囊生长发育调控,从而影响被毛形态。目前还没有绒山羊FGF5基因敲除的报道,而且绒山羊的FGF5基因缺失后被毛是否会显著生长仍然是一个悬而未决的问题。本研究从家畜育种角度出发,把能够干扰抑制FGF5基因表达的RNAi载体导入绒山羊体细胞,利用体细胞克隆技术创造出缺失FGF5基因的绒山羊,进而选育出产绒性能优良的绒山羊新品系。首先体外培养内蒙古绒山羊胎儿皮肤成纤维细胞,同时合成干扰FGF5基因表达的pGCsilencerTM U6/Neo/GFP/RNAi载体,脂质体介导RNAi载体转染绒山羊胎儿成纤维细胞,GFP和G418筛选表达绿色荧光的转基因细胞,RT-PCR检测转基因细胞中FGF5基因的表达,将FGF5表达量显著降低的转基因细胞作为核供体,移入成熟、去核的绒山羊卵母细胞中,得到克隆胚胎,进一步筛选绿色荧光胚胎移植到受体绒山羊子宫内,观察绒山羊受孕情况。实验结果:体外成功培养绒山羊胎儿皮肤成纤维细胞,经G418筛选得到表达绿色荧光的转FGF5RNAi载体的细胞,转基因细胞个体变大、形态不规则、生长速度降低,经胰蛋白酶消化后迅速贴壁,与对照组比较有显著性差异。经RT-PCR检测,转基因细胞中FGF5基因的表达与对照组比较有显著性差异。体细胞核移植获得转基因荧光克隆胚胎,胚胎移植后受体羊没有妊娠现象。结果表明,FGF5基因缺失后对绒山羊细胞形态、生长增殖能力、细胞的性质有显著的影响。作为核供体在体细胞克隆胚胎的早期发育中起着非常重要的作用。降低绒山羊细胞中FGF5基因的表达是否为制约核移植胚胎发育的关键因素还需进一步的研究。
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