PRDM1与Rb相互作用对细胞周期调控的影响

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目的:通过对PRDM1 a、β与Rb三者的内在联系及它们在细胞周期调控中的不同功能的研究,进一步揭示PRDM1蛋白与Rb相互作用对细胞周期的影响。方法:实验分为四部分。第一部分,将特异性针对Rb基因的SiRNA (SiRb)转染到Hela细胞,建立一过性敲除Rb蛋白的细胞模型,转染了无关SiRNA (SiNS)的Hela细胞作为阴性对照。第二部分,分别在敲除和未敲除Rb的Hela细胞中转染PRDM1 a表达载体或其阴性对照空载体,细胞经PI染色后通过流式细胞仪检测分析,观察对比在Rb去除前后PRDM1 a对细胞周期调控的影响。第三部分,分别在敲除和未敲除Rb的Hela细胞中转染PRDM1β表达载体或其阴性对照空载体,细胞经PI染色后通过流式细胞仪检测分析,观察对比在Rb去除前后PRDM1β对细胞周期调控的影响。第四部分,分别在长势良好的Rb+hela细胞中转入含空载体的质粒,含PRDM1 a cDNA的质粒和含PRDM1βcDNA的质粒,通过western blot蛋白电泳检测,观察Rb蛋白的表达状态和磷酸化程度。结果:1.在有Rb表达的hela细胞系中PRDM1a可以将大部分细胞阻滞在G1期。在无Rb表达的hela细胞系中PRDM1a对细胞周期G1的阻滞功能解除。2.Rb基因敲除前后,PRDM1β在Hela细胞中的表达均不导致细胞周期G1期的阻滞。3. PRDM1a在Hela细胞中过表达可使部分Rb蛋白维持在非磷酸化即活化状态,而PRDM1β不具有此作用。结论:PRDMla可诱导部分肿瘤细胞阻滞在细胞周期G1期,此作用依赖于Rb蛋白的存在,而且该作用机制的分子基础之一是因为PRDM1a可使部分Rb蛋白维持在非磷酸化即活化状态。PRDM1β不具有上述功能。本研究结果提示PRDM1a和PRDM1β具有不同的生物学功能,PRDMla可能具有抑癌基因的作用,而PRDM1β可能与肿瘤进展有关。
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