全氟辛酸诱导小鼠睾丸间质细胞毒性的蛋白质组学与代谢组学研究

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全氟辛酸(PFOA)一种人工合成的全氟烷烃化合物,由于其优良的理化性质在日常生活中和工业生产中被广泛使用,并且很难被降解,从而造成了广泛的环境污染。PFOA在生物体内蓄积会对肝脏功能、心血管功能、免疫系统功能、甲状腺功能、生殖系统功能和神经功能造成损害。然而目前对于PFOA的毒性研究主要集中在肝脏毒性方面,对于其他方面的毒性,尤其是雄性生殖毒性研究还比较少。因此,本论文以小鼠睾丸间质细胞(MLTC-1)作为体外实验模型,主要从蛋白组学和代谢组学两个层面研究了PFOA对MLC-1细胞的毒性效应:1)测定了MLTC-1在PFOA作用下的类固醇激素水平及类固醇激素合成相关基因表达和ROS含量的变化。PFOA可以影响MLTC-1合成类固醇激素,在低剂量处(10μM),17-羟-孕酮和雄烯二酮出现了显著上升,17-羟-孕酮、雄烯二酮和睾酮在最高剂量组(300μM)均出现了明显下降。类固醇激素合成相关基因StAR、3β-HSD、17β-HSD在PFOA作用下均出现了明显降低,P450Scc在PFOA作用下无明显变化,CYP17在PFOA作用下出现了显著上升,表明PFOA可通过改变MLTC-1细胞中类固醇激素合成关键基因的表达影响激素合成。PFOA还可显著增加MLTC-1细胞内的ROS含量,从而对细胞产生氧化胁迫,进而可能影响细胞的类固醇激素合成。2)利用高效四级杆轨道阱液相质谱进行了蛋白质组学分析,共找到65种在PFOA暴露作用下MLTC-1中表达的差异蛋白,其中25种蛋白表达上调,40种蛋白表达下调。这些差异蛋白的功能主要与细胞内的氧化还原过程、转录调节、细胞结构、物质和能量代谢及激素合成和分泌相关。3)利用超高效液相色谱-质谱进行了代谢组学分析,共发现19种在PFOA暴露下MLTC-1细胞中含量发生改变的代谢物,其中9种代谢物水平下调,10种代谢物水平上调。所涉及的代谢过程主要有谷胱甘肽代谢、嘌呤代谢、蛋氨酸与半胱氨酸代谢、甘油磷脂代谢、脂肪酸代谢、氨基酸代谢、TCA循环及激素合成。这些代谢过程与MLC-1细胞内的物质与能量代谢、氧化还原过程、激素合成都有着十分密切的关系。总之,本研究结果不仅可为进一步揭示PFOA诱导雄性生殖毒性的分子机制提供参考,还有望筛选蛋白和代谢标志物用于PFOA暴露的环境健康风险评估。
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